[发明专利]一种构建麦角硫因生产菌的方法

说明书

本发明公开了一种圆红酵母工程菌及其构建方法，该圆红酵母工程菌能够表达外源的egt1酶，从而提高生产麦角硫因的能力，发酵后麦角硫因产量接近5g/L，具有工业化应用前景。

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种构建麦角硫因生产菌的方法，尤其涉及一种构建用于生产麦角硫因的圆红酵母菌的方法。

背景技术

麦角硫因(L-ergothionine，EGT)，化学名为2-巯基组氨酸三甲基内盐，结构式如下：

麦角硫因是至今唯一为人们所知的天然2-硫代咪唑氨基酸。麦角硫因具有抗氧化、抗炎症、延长细胞生存周期或抗细胞衰老活性，改善神经细胞生成等多种生理功效。同时在多种疾病模型中包括阿兹海默、糖尿病等的并发症中，具有较好的保护细胞和抗击损伤的功效，市场应用前景广阔。

目前，麦角硫因可以经化学合成、食用真菌提取和微生物发酵生产获得。有多种微生物被证实具有麦角硫因的合成能力，包括分枝杆菌、链霉菌、霉菌和酵母等多类微生物。有许多专利技术涉及利用微生物发酵生产麦角硫因，比如CN102978121B公开了食用菌白香蘑菌催化组氨酸底物可生成麦角硫因，底物转化率可达70％，未报道产物产率；CN103184246A公开了大型丝状真菌花脸香蘑摇瓶发酵10天，麦角硫因产量51mg/L；WO2017150304A1公开了青紫链霉菌Streptomyces lividans经7天发酵，麦角硫因产量900mg/L；WO2015180492A1公开了糙皮侧耳在75L发酵罐中经14天发酵，麦角硫因产量352mg/L；CN103734022公开了食用菌糙皮侧耳经7～15天发酵，麦角硫因产量最高产量达143.7mg/L；CN107250347公开了基因工程曲霉包括米曲霉、酱油曲霉和黑曲霉，经基因工程改造后，发酵产量可达438mg/L；大肠杆菌经基因工程改造，异源表达分枝杆菌的麦角硫因基因合成簇，麦角硫因产量640mg/L；CN106661585公开了大肠杆菌经基因工程改造，异源表达分枝杆菌的麦角硫因基因合成簇，工程菌发酵麦角硫因产量12mg/L；CN105296559A公开了糙皮侧耳食用菌经过多重发酵配方成分的调整，发酵至少6天，麦角硫因产量最高315.7mg/L；CN201910664772.8A公开了以枯草芽孢杆菌168为宿主表达外源基因，构建的基因工程菌麦角硫因产量达到568.4mg/L。