[发明专利]一种可溶性高效表达的rChGM-CSF-IFNα融合蛋白及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202010195228.6 | 申请日： | 2020-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN111303302A | 公开（公告）日： | 2020-06-19 |
| 发明（设计）人： | 王明丽;何志远;赵俊;张俊玲 | 申请（专利权）人： | 芜湖天明生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K38/21;A61K47/64;A61P31/04 |
| 代理公司： | 安徽合肥华信知识产权代理有限公司 34112 | 代理人： | 余成俊 |
| 地址： | 241000 安徽省芜湖*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 可溶性 高效 表达 rchgm csf ifn 融合 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种可溶性高效表达的rChGM-CSF-IFNα融合蛋白，其特征在于，具有序列表中SEQID No.4所示的氨基酸序列。
2.一种可溶性高效表达的rChGM-CSF-IFNα融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）分别提取扩增鸡GM-CSF和鸡IFN-α基因；
（2）将扩增后的鸡GM-CSF和鸡IFN-α基因连接，得到融合蛋白基因；
（3）构建重组克隆载体和重组表达载体，筛选得到基因工程菌；
（4）融合蛋白的可溶性高效表达；
（5）融合蛋白纯化。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中鸡GM-CSF和鸡IFN-α基因的序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中提取扩增鸡GM-CSF和鸡IFN-α基因时的扩增引物分别为：
GM-CSF-F1：GCGGGATCCATGTTAGCGCAGC；
GM-CSF-R1：ACCACCACCAGAACCACCACCACCAATGCAATCTTTTTCTTCCG；
IFN-α-F1：GGTGGTTCTGGTGGTGGTGGTTCTATGGCTGTGCCTGC；
IFN-α-R1：CCGAAGCTTAGTGCGCGTGTTG。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中融合蛋白基因的序列如SEQ ID NO.3所示。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中鸡GM-CSF和鸡IFN-α基因是通过柔性linker连接。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3中筛选方法为使用含氨苄青霉素的LB培养基进行筛选。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4中融合蛋白的可溶性高效表达是挑取步骤3得到的基因工程菌，于氨苄青霉素LB培养基进行发酵培养，使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷进行诱导表达，获得融合蛋白。
9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤5中纯化是仅需经His-tag亲和层析纯化。
10.一种可溶性高效表达的rChGM-CSF-IFNα融合蛋白在延长鸡IFN-α的半衰期和抗病毒活性中的应用。
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