[发明专利]一种生物组织包含的醛基含量的检测方法

说明书

本发明提供了一种生物组织包含的醛基含量的检测方法，包括以下步骤：配制多个具有不同浓度梯度的2,4‑二硝基苯肼标准溶液，测定所述多个标准溶液在特定波长处的吸光度值，绘制浓度和吸光度值呈函数关系的标准曲线；配制2,4‑二硝基苯肼反应溶液，并测定所述反应溶液在特定波长处的吸光度值A1；将所述2,4‑二硝基苯肼反应溶液与生物组织反应，测定反应后溶液在特定波长处的吸光度值A2；基于A1、A2以及所述标准曲线，计算所述生物组织包含的醛基的含量。本发明的检测方法，通过将生物组织浸泡在2,4‑二硝基苯肼溶液中，测定反应前后2,4‑二硝基苯肼紫外吸光度值的变化，间接测定生物组织醛基含量，从而具有操作简单、检测快速、检测准确度高等优点。

技术领域

本发明属于检测领域，具体地，本发明涉及一种生物组织包含的醛基含量的检测方法。

背景技术

人工心脏瓣膜分为机械瓣膜和生物瓣膜，生物瓣膜主要由合金支架和瓣叶构成，瓣叶承载着人工心脏瓣膜的开合功能，实现血流的单向运动。瓣叶通常采用牛心包、猪心包等生物组织构成，目前限制生物瓣膜耐久性的一个主要原因是瓣叶的钙化，钙化后的瓣叶开合功能会减弱甚至丧失。生物组织主要由胶原纤维、弹性纤维以及结缔组织构成，这些组织中含有氨基、羧基、羟基、巯基等官能团。为增强生物组织的力学性能同时避免变质，现取的新鲜生物组织通常会用戊二醛进行交联固定，其原理是戊二醛的醛基与生物组织中的氨基反应。由于在反应过程中会存在戊二醛的一端醛基未反应，残留在生物组织上，未反应的醛基在一定条件下被氧化为羧基，进而与钙离子反应形成钙化位点，引起瓣叶的钙化，因此确认生物组织中醛基的含量，对于评估瓣叶的防钙化能力至关重要。

但是，由于醛基是通过化学键与生物组织连接，反应物与醛基反应后同样是通过化学键连接于生物组织，由于产物无法溶解在溶液中，所以不能对产物进行直接的检测，而通过化学消解的方法，由于通常使用强酸，可能造成组织中已反应的醛基释放，进而影响实际游离醛基含量。因此一直没有有效的方法对生物组织中的醛基含量进行检测。2006年Edwards Lifesciences在发表的文章(Carpentier-Edwards ThermaFix Process AMethod for Extracting Calcium Binding Sites from Pericardial Tissue)中提到将醛基在轻度酸性溶液中氧化为羧基，进而通过测定羧基含量间接反映醛基含量，由于生物组织本身含有一定量的羧基，因此此法无法真实反映醛基含量。2016年EdwardsLifesciences在发表的文章(The association of bound aldehyde content withbioprosthetic tissue calcification)中提供一种新的测定生物组织醛基方法：先在一定条件下用胱胺二盐酸盐与醛基反应形成第一中间产物，然后第一中间产物与5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸酸)反应形成第二中间产物，最后加入三(2-羧乙基)膦分解第二中间产物释放被测物质5-硫代-2-硝基苯甲酸，此法反应步骤较多，因此检测准确度有限。

发明内容

针对现有技术存在的生物组织包含的醛基含量检测的不足，本发明提供一种生物组织包含的醛基含量的检测方法。

具体来说，本发明涉及如下方面：

1一种生物组织包含的醛基含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

配制多个具有不同浓度梯度的2,4-二硝基苯肼标准溶液，测定所述多个标准溶液在特定波长处的吸光度值，绘制浓度和吸光度值呈函数关系的标准曲线；

配制2,4-二硝基苯肼反应溶液，并测定所述反应溶液在特定波长处的吸光度值A1；

将所述2,4-二硝基苯肼反应溶液与生物组织反应，测定反应后溶液在特定波长处的吸光度值A2；

基于A1、A2以及所述标准曲线，计算所述生物组织包含的醛基的含量。

2根据项1所述的方法，其特征在于，所述特定波长为218、264或323nm中的一种。