[发明专利]一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法

权利要求书

1.一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）配液：凝胶采用琼脂糖配制，加入明胶用于确定蛋白酶活性，加入β-环状糊精增加所制备凝胶的稳定性，加入PBS作为保护剂；最后将以上原材料在去离子水中混合均匀；

（2）化胶：将所配置溶液置于高压蒸气灭菌锅中，在0.5Mpa的条件下加热至70℃，加热时间持续5-15min，至溶液呈澄清状态取出；

（3）冷凝成型：准备玻璃室厚度为1mm的玻璃室，玻璃室需可拆卸供所制备凝胶的取用；将所制备的凝胶温度控制在65-75℃，浇铸在玻璃腔室内冷却成型；

（4）孵育：凝胶冷却成型后立即拆开玻璃室的一面，稳定住凝胶的一面将其覆盖在平整干燥的根际土壤表面；用塑料薄膜覆盖住凝胶防止其失水干燥，在黑暗条件中以室温孵育24小时；

（5）染色：将孵育好的凝胶取下，放置在蒸馏水中，用水平摇床以80rmp处理2分钟以除去表面的附着的土壤；配置水合茚三酮染色溶液并将处理好的凝胶放置在染色溶液中着色10分钟；

（6）脱色：将着色后的凝胶置于脱色溶液中在水平摇床中以80rmp处理25-35分钟取出。

2.根据权利要求1所述的一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法，其特征在于所述的步骤（1）配液中，凝胶采用1.4 （w/v）%琼脂糖配制，明胶含量为0.08w/v%，β-环状糊精含量为0.2 （w/v）%，PBS浓度为0.2 （v/v）%。

3.根据权利要求1所述的一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法，其特征在于所述的步骤（5）染色中所用染色溶液用0.5 （w/v）%水合茚三酮配置，并用乙酸将溶液的pH调节至5.9。

4.根据权利要求1所述的一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法，其特征在于所述的步骤（6）脱色中所用的脱色溶液用10 （v/v）%乙醇和10 （v/v）%乙酸配制。