[发明专利]一种抗肿瘤巨噬细胞的制备方法

说明书

本发明公开了一种抗肿瘤巨噬细胞的制备方法，包括以下步骤：获得原代骨髓干细胞或分离外周血中单核细胞进行原代细胞培养，加入集落刺激因子7天后获得巨噬细胞；获得离体肿瘤细胞进行原代肿瘤细胞培养，并获得原代肿瘤细胞；将得到的原代肿瘤细胞及培养液进行放疗照射，收集放疗后的上清液，获得所需微颗粒和凋亡的肿瘤细胞碎片混合物；将得到的混合物进行离心，即得到所述携带肿瘤抗原微颗粒；将得到的微颗粒处理步骤1获得的原代巨噬细胞，即得到所述抗肿瘤巨噬细胞。该抗肿瘤巨噬细胞的制备方法，实现个性化治疗，制备出可针对患者不同的肿瘤抗原的巨噬细胞；制备工艺简单，较易生产。

技术领域

本发明涉及抗肿瘤领域，更特别地，涉及一种抗肿瘤巨噬方法的制备方 法。

背景技术

巨噬细胞是免疫反应中的下游效应关键的执行者，肿瘤微环境中，巨噬 占50％以上，更重要的是巨噬细胞的比例与肿瘤的预后呈负相关，进一步说 明了巨噬细胞在肿瘤中的重要性。肿瘤组织浸润区的巨噬细胞(Tumor Associated Macrophages，TAMs)促进了肿瘤的进展，肿瘤细胞通过高表达 CD47和巨噬细胞表面的SIRPα结合，直接导致肿瘤细胞不仅可以和肿瘤细胞 和谐共处，而且还会通过促进肿瘤内血管的增殖，抑制效应T细胞等促进肿 瘤的扩增和生长。以往针对巨噬细胞的应用集中在抑制单核细胞在肿瘤微环 境分化为肿瘤相关巨噬细胞、杀伤肿瘤相关巨噬细胞以及促进微环境中TAMs 重编程为M1等，但清除巨噬细胞会抑制全身免疫反应，使机体易感染。由此 我们提出回输特异性抗肿瘤巨噬细胞从而发挥抑制肿瘤生长的效果。

微颗粒由肿瘤细胞所释放，经放疗、双氧水或过氧化氢处理的肿瘤细胞 释放更多携带肿瘤抗原的微颗粒，此种微颗粒可以促进巨噬细胞向M1极化， 增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬，也可协同效应T细胞发挥抗肿瘤效果。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了一种抗肿瘤巨噬细胞的制备方法，该抗 肿瘤巨噬细胞通过直接吞噬肿瘤和激活T细胞发挥抗肿瘤效应，解决常规化 疗效果差、副作用大、易产生耐药性的技术问题并实现个体化治疗。

本发明是由以下技术手段实现的：

一种抗肿瘤巨噬细胞的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、获得原代骨髓干细胞或分离外周血中单核细胞进行原代细胞培 养，加入集落刺激因子7天后获得巨噬细胞；

步骤2、获得离体肿瘤细胞进行原代肿瘤细胞培养，并获得原代肿瘤细胞；

步骤3、将所述步骤2得到的原代肿瘤细胞及培养液进行放疗照射，收集 放疗后的上清液，获得所需微颗粒和凋亡的肿瘤细胞碎片混合物；

步骤4、将所述步骤3得到的混合物进行离心，即得到所述携带肿瘤抗原 微颗粒；

步骤5、将所述步骤4得到的微颗粒处理步骤1获得的原代巨噬细胞，即 得到所述抗肿瘤巨噬细胞。

所述的巨噬细胞可来源于人体外周血分离所得淋巴细胞

所述携带肿瘤抗原的微颗粒来源于自体来源的肿瘤细胞或肿瘤细胞系产 生的肿瘤细胞。

所述离体肿瘤细胞来自于实体瘤。

一种抗肿瘤巨噬细胞的制备方法制得的抗肿瘤巨噬细胞，所述抗肿瘤巨 噬细胞为M1促炎巨噬细胞；所述抗肿瘤巨噬细胞表面CD86和MHCⅡ高表 达，胞内CD206低表达；所诉抗肿瘤巨噬细胞具有更强吞噬肿瘤细胞的能力。

一种抗肿瘤巨噬细胞的制备方法制得的抗肿瘤微巨噬细胞在抗肿瘤疗法 中的应用。

本发明具有以下优点：

①实现个性化治疗，制备出可针对患者不同的肿瘤抗原的巨噬细胞；

②制备工艺简单，较易生产；