[发明专利]一种同时测定皮肤角质层贴片中PCA、t-UCA的分析方法

说明书

一种同时测定皮肤角质层贴片中PCA、t‑UCA的分析方法，其特征是采用稀释剂对皮肤角质层贴片进行前处理后离心，得到上清液，以甲醇和磷酸二氢钾溶液为流动相，在苯基键合硅烷的色谱柱上进行等度洗脱，采用外标法计算PCA、t‑UCA的含量并对该方法进行方法学验证。本方法能够有效测定皮肤角质细胞中的PCA和t‑UCA，尤其实现了在同一色谱条件下PCA和t‑UCA与溶剂峰及皮肤中其它成分的分离，在较短时间内对PCA和t‑UCA进行准确测定，灵敏度高，重复性好。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，涉及一种测定皮肤角质层贴片中PCA、t-UCA的分析方法，实现了在同一色谱条件下PCA和t-UCA与溶剂峰及皮肤中其它成分的分离，在较短时间内对PCA和t-UCA进行准确测定。

背景技术

吡咯烷酮羧酸(PCA)是一种具有优良吸湿性能的天然保湿剂，作为自然保湿因子的最重要的成分大量存在于皮肤角质层中。尿刊酸是组氨酸的代谢产物，以反式(t-UCA)存在于皮肤角质层中，其作为一种紫外吸收剂，对皮肤可以起到一定的防护作用。检测皮肤角质层中的PCA和t-UCA，可以更好的了解皮肤状态，帮助化妆品企业开发出更有针对性的产品。中国专利申请CN108982716A公开了一种皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法，其提取方法较为复杂，测定PCA和UCA的方法中，PCA出峰时间过早，容易与溶剂峰重叠造成测定不准确。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够同时快速、准确测定皮肤角质层贴片中PCA和t-UCA的方法，可用于了解皮肤状态及针对性皮肤产品的开发。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：一种同时测定皮肤角质层贴片中PCA、t-UCA的分析方法，用稀释剂对皮肤角质层贴片进行前处理后离心取上清液，采用反相高效液相色谱法，用苯基键合硅胶色谱柱，甲醇-磷酸二氢钾溶液为流动相进行等度洗脱。

所述方法中，前处理稀释剂为磷酸二氢钾溶液，浓度为0.02mol/L，含庚烷磺酸钠5mmol/L，磷酸调节pH至2.5。

所述流动相组成为甲醇-磷酸二氢钾溶液(3:97)，其中磷酸二氢钾溶液中含5mmol/L庚烷磺酸钠，磷酸二氢钾浓度为0.02mol/L，pH值为2.5。

所述的色谱柱为Thermo BetaBasic Phenyl，250×4.6mm，5μm。

色谱条件包括：检测波长为210nm；流动相洗脱速率为1.0mL/min；色谱柱温度为20℃；样品进样量为20μL。

本发明的有益效果是：与现有技术相比，本发明所述的同时测定皮肤角质层贴片中PCA和t-UCA的分析方法，前处理方法更为简便，分析时间更短，且可以实现在同一色谱条件下PCA、t-UCA与溶剂峰及其它皮肤成分色谱峰的较好分离，灵敏度高，重复性好，可用于皮肤角质层中PCA、t-UCA的准确测定。

附图说明

附图1对照品图谱

附图2皮肤角质层贴片样品图谱

附图3空白溶剂图谱

附图4空白贴片图谱

具体实施方式

以下结合具体实施例进一步描述本发明的技术方案，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

综合考虑PCA、t-UCA的紫外吸收情况，本试验选择在两者吸收都较强的210nm处进行测定。试验发现，PCA在C18柱上保留较差，调整流动相比例，改变缓冲盐类型，调整pH值以及加入离子对试剂后等措施均无法实现PCA与溶剂峰的有效分离。考虑到苯基柱对有共轭体系的成分的选择性较好，改用苯基柱进行试验。加入离子对试剂并调整pH值，以达到尽量延长PCA的保留时间，使其与溶剂峰及皮肤贴片的未知杂峰分离的同时，尽量缩短分析时间。实施例1PCA、t-UCA的高效液相色谱分析