[发明专利]黄瓜硝酸盐转运蛋白NPF7.2基因、蛋白及表达方法

权利要求书

1.一种黄瓜NPF7.2基因，其序列如SEQ ID No.1所示。

2.如权利要求1所述的黄瓜NPF7.2基因，其特征在于，黄瓜NPF7.2基因序列全长为1806bp。

3.如权利要求1所述的黄瓜NPF7.2基因编码的蛋白，其序列如SEQ ID No.2所示。

4.如权利要求3所述的蛋白，其特征在于，所述蛋白所对应的氨基酸数目为601个，分子量为66594.04，理论等电点为7.5，负电荷氨基酸残基数为50个，正电荷残基数为51，不稳定系数为27.98，为稳定蛋白，脂肪系数96.04，总平均亲水性0.23。

5.如权利要求3所述的蛋白，其特征在于，所述蛋白的跨膜螺旋区位置分别在SEQ IDNo.2的1-47，71-82，106-114，138-157，181-199，223-228，252-352，376-387，411-429，453-510，534-558，582-601。

6.一种黄瓜NPF7.2基因的表达方法，其特征在于，具体步骤为：

(1)合成黄瓜NPF7.2基因的引物序列NPF7.2F和NPF7.2R，分别如SEQ ID No.3、SEQ IDNo.4所示；

(2)使用实时荧光定量PCR法扩增出黄瓜NPF7.2基因序列全长，反应产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳回收；

(3)回收产物连接pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α。

7.如权利要求6所述的黄瓜NPF7.2基因的表达方法，其特征在于，实时荧光定量PCR反应体系为20μl，其中2×Taq 10μl，NPF7.2F 0.5μl，NPF7.2R 0.5μl，模板1μl，ddH₂O 8μl；PCR反应条件为：95℃3min，95℃30s，57℃30s，72℃1min，35个循环；72℃5min。

8.如权利要求6所述的黄瓜NPF7.2基因的表达方法，其特征在于，所述黄瓜NPF7.2基因主要在根与花中表达。