[发明专利]类器官培养用细胞培养基、培养方法及类器官

权利要求书

1.一种类器官培养方法，其特征在于，具备：

制备细胞外基质的细胞外基质制备工序；

使上皮干细胞、上皮细胞、上皮肿瘤细胞、或包含这些细胞中的至少任1种的组织粘接于所述细胞外基质上的粘接工序；

在所述粘接工序之后，添加类器官培养用细胞培养基，在氧浓度15％～0.1％的低氧条件下，对所述上皮干细胞、所述上皮细胞、所述上皮肿瘤细胞、或所述包含这些细胞中的至少任1种的组织进行培养，形成类器官的类器官形成工序。

2.根据权利要求1所述的类器官培养方法，其中，所述类器官培养用细胞培养基包含选自Wnt激动剂、、骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)抑制剂、转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)抑制剂、及p38抑制剂的至少1种。

3.根据权利要求1所述的类器官培养方法，其中，所述类器官培养用细胞培养基包含选自胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factor 1，IGF1)、成纤维细胞生长因子2(Fibroblast growth factor 2，FGF2)、及表皮调节素(Epiregulin，EREG)的至少2种以及选自下述i)～iii)的成分中的至少1种：

i)Wnt激动剂、

ii)BMP抑制剂、

iii)TGF-β抑制剂。

4.根据权利要求3所述的类器官培养方法，其中，实质上不含EGF及p38抑制剂。

5.根据权利要求4所述的类器官培养方法，其中，包含IGF1及FGF2。

6.根据权利要求2～4中的任一项所述的类器官培养方法，其中，所述Wnt激动剂是选自Wnt蛋白、R-海绵硬蛋白、及GSK-3β抑制剂的至少1种。

7.根据权利要求6所述的类器官培养方法，其中，所述Wnt蛋白与其稳定化物质阿法敏形成复合物。

8.根据权利要求4～7中的任一项所述的类器官培养方法，其中，所述Wnt激动剂为Wnt蛋白及R-海绵硬蛋白。

9.根据权利要求6所述的类器官培养方法，其中，所述Wnt蛋白为选自Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11、及Wnt16的至少1种。

10.根据权利要求6所述的类器官培养方法，其中，所述R-海绵硬蛋白是选自R-海绵硬蛋白1、R-海绵硬蛋白2、R-海绵硬蛋白3、及R-海绵硬蛋白4的至少1种。

11.根据权利要求2～4中的任一项所述的类器官培养方法，其中，所述BMP抑制剂是选自包括头蛋白、格雷林、腱蛋白、腱蛋白结构域的腱蛋白样蛋白，包括卵泡抑素、卵泡抑素结构域的卵泡抑素相关蛋白，包括DAN、DAN半胱氨酸结结构域的DAN样蛋白，硬骨素/SOST、及α2-巨球蛋白的至少1种。

12.根据权利要求11所述的类器官培养方法，其中，所述BMP抑制剂为头蛋白。

13.根据权利要求2～4中的任一项所述的类器官培养方法，其中，所述TGF-β抑制剂可以是选自A83-01、SB-431542、SB-505124、SB-525334、SD-208、LY-36494、及SJN-2511的至少1种。

14.根据权利要求11所述的类器官培养方法，其中，所述TGF-β抑制剂为A83-01。