[发明专利]EB病毒BALF4蛋白的抗原表位

说明书

本发明涉及分子生物学与免疫学技术领域，尤其涉及EB病毒BALF4蛋白的抗原表位。本发明提供了EB病毒BALF4蛋白的抗原表位，其如SEQ ID NO：1所示，并提供了编码该表位的核酸分子，还提供了其抗原蛋白、特异性抗体及其应用。本发明所述的抗原表位具有良好的保守性、敏感性及特异性，所制得的抗体效价较高，能够应用于临床诊断及分子机制的研究。

技术领域

本发明涉及分子生物学与免疫学技术领域，尤其涉及EB病毒BALF4蛋白的抗原表位。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属的成员，基因组为DNA。EB病毒具有在体内外专一性地感染人类及某些灵长类B细胞的生物学特性。人是EB病毒感染的宿主，主要通过唾液传播。无症状感染多发生在幼儿，3～5岁幼儿90％以上曾感染EB病毒，90％以上的成人都有病毒抗体。EB病毒是传染性单核细胞增多症的病原体，此外EB病毒与鼻咽癌、儿童淋巴瘤的发生有密切相关性，被列为可能致癌的人类肿瘤病毒之一。目前所测EB病毒抗体，主要有针对病毒的衣壳抗原(CA)、早期抗原(EA)和核抗原(EBNA)。

BALF4是EB病毒裂解期蛋白，已有文献报道表明其与病毒免疫原性(PMID：19244320，16549597)、病毒感染宿主能力(PMID：12409611)、宿主体内病毒复制(PMID：8627735)及肿瘤相关Jak-STAT和Phosphatidylinositol信号通路激活相关(PMID：28415594)。因此，检测BALF4蛋白的表达情况对于研究其致病机制等方面存在非常重要的意义。然而，EB病毒基因组存在的高度可变异性，尽管BALF4的序列已经与NCBI数据库中登录，但仍难以确定高保守性和高度特异性的抗原结构域，因此，目前还上缺乏可供临床检测及科学研究使用的BALF4抗体，也因此，对于BALF4在肿瘤组织中表达检测及其致病机制研究等均受到极大的限制。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供EB病毒BALF4蛋白的抗原表位，该表位制备抗体能够用于特异性检测BALF4的表达，可满足包括免疫印迹、免疫组化、免疫共沉淀、染色质共沉淀等实验需要，有助于相关临床检验及科学研究的开展以明确EB病毒与肿瘤致病的相关性及其分子机制。

本发明提供的EB病毒BALF4蛋白的抗原表位，其如SEQ ID NO：1所示。

本发明从31例EBV感染的肿瘤组织中，获得了EB病毒BALF4蛋白的保守序列，该序列如SEQ ID NO：3所示，通过对该蛋白序列进行可表达性和抗原性进行预测筛选，最终确定抗原表位为SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的245～400位氨基酸，即SEQ ID NO：1所示的多肽。该区段不含突变氨基酸位点，免疫原性较好，二级结构稳定，易于表达。

本发明还提供了编码SEQ ID NO：1所示抗原表位的核酸分子。

肿瘤组织中编码BALF4蛋白的DNA分子的核酸序列如SEQ ID NO：4所示。其中编码SEQ ID NO：1所示抗原表位的核酸分子共计156bp。为了使该抗原表位能够顺利的在原核系统中进行表达，对编码其的核酸分子进行密码子优化，优化后的序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供了一种核酸载体，其包含编码SEQ ID NO：1所示抗原表位的核酸分子。

本发明所述的核酸载体中，所述编码SEQ ID NO：1所示抗原表位的核酸分子的序列如SEQ ID NO：2所示。该载体的骨架载体为pGEX4T-AB1。

本发明还提供了一种重组宿主，其包含本发明所述的核酸载体。