[发明专利]一种等离子体作用结合氧限制生产辅酶Q10

权利要求书

1.一种等离子体作用结合氧限制生产辅酶Q₁₀的方法，其特征在于，所述方法包括：ARTP诱变的步骤；氧限制筛选辅酶Q₁₀高产菌株的步骤；发酵生产辅酶Q₁₀的步骤；其中，

所述ARTP诱变的步骤，包括：

将类球红细菌的菌悬液均匀覆盖在载片表面，后将载片放置于ARTP诱变仪中，以惰性气体作为工作气体，进行诱变处理，洗脱，即可得到诱变后的菌悬液；

所述氧限制筛选辅酶Q₁₀高产菌株的步骤，包括：

无菌条件下，将所述诱变后的菌悬液进行稀释，涂布在含有添加了0.2～0.4g/L无水亚硫酸钠的平板培养基的氧限制平板上，进行第一次培养，后得到长有单菌落的平板；

从所述长有单菌落的平板中挑取单菌落，并置于24孔板中，加入种子培养基，盖上盖子，进行第二次培养，得到种子液。

2.根据权利要求1所述的等离子体作用结合氧限制生产辅酶Q₁₀的方法，其特征在于，所述诱变处理具体为：在10SLM的载气量下诱变15～30秒；SLM指在标况下升每分钟。

3.根据权利要求1所述的等离子体作用结合氧限制生产辅酶Q₁₀的方法，其特征在于，所述第一次培养为：在32℃避光培养6～7天。

4.根据权利要求1所述的等离子体作用结合氧限制生产辅酶Q₁₀的方法，其特征在于，在所述氧限制筛选辅酶Q₁₀高产菌株的步骤中，所述种子培养基的装液量为2mL。

5.根据权利要求1所述的等离子体作用结合氧限制生产辅酶Q₁₀的方法，其特征在于，所述第二次培养为：在32℃、220r/min的条件下培养20h，获得种子液。

6.根据权利要求1所述的等离子体作用结合氧限制生产辅酶Q₁₀的方法，其特征在于，所述发酵生产辅酶Q₁₀的步骤，包括：

将所述种子液按16％的接种量接种至装有发酵培养基的24孔板中进行发酵培养，即得发酵液。

7.根据权利要求6所述的等离子体作用结合氧限制生产辅酶Q₁₀的方法，其特征在于，所述发酵培养为：在32℃、220r/min的条件下避光培养48h。

8.根据权利要求1所述的等离子体作用结合氧限制生产辅酶Q₁₀的方法，其特征在于，所述平板培养基包括：酵母提取物、磷酸氢二钾、氯化钠、硫酸亚铁、硫酸镁、琼脂粉；消前pH7.0～7.2。

9.根据权利要求1所述的等离子体作用结合氧限制生产辅酶Q₁₀的方法，其特征在于，所述种子培养基包括：硫酸铵、酵母提取物、谷氨酸钠、玉米浆干粉、葡萄糖、磷酸氢二钾、硫酸亚铁、硫酸镁、氯化钠、碳酸钙；消前pH7.1～7.2。

10.根据权利要求6所述的等离子体作用结合氧限制生产辅酶Q₁₀的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括：硫酸铵、谷氨酸钠、玉米浆干粉、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、硫酸镁、氯化钠、氯化钙、葡萄糖、碳酸钙；消前pH6.5～6.6。