[发明专利]一种薏苡Waxy基因突变的PCR检测引物及其应用

权利要求书

1.一种薏苡Waxy基因突变的PCR检测引物，其特征在于，其特征在于，所述检测引物包括：

PCR正向引物：5’-GGACGTCAGCGAGTGGGACC-3’，结合区域为第9外显子保守区；

PCR反向引物：5’-ACGAGTCCACCGGTGGACGC-3’，结合区域为第11外显子保守区。

2.一种如权利要求1所述的薏苡Waxy基因突变的PCR检测引物在薏苡选育中的应用，其特征在于，用于薏苡单株粳、糯性分型。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)田间种植与留苗：选取成熟饱满的薏苡籽粒，采用直播法进行播种，行距40～80cm、株距10～50cm，播种量1～10粒/窝以保证出苗率，3～6叶期定苗、留苗；

(2)薏苡Waxy基因分型：在薏苡苗期，取少量薏苡叶片提取薏苡基因组DNA，以提取的薏苡基因组DNA为模板，采用PCR检测引物进行特异性PCR扩增反应；扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分型检测；

(3)株系选择：根据凝胶电泳分型结果，淘汰杂合体单株，保留纯合体单株。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增反应体系为：总体积25μL，包含Taq PCR MasterMix 12.5μL，10μM PCR正向引物1μL，10μM PCR反向引物1μL，ddH₂O 9.5μL，模板DNA30～50μg。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，PCR扩增反应程序的退火温度为65～69.7℃。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，PCR扩增反应程序为：94℃预变性3min，94℃变性50s，67℃退火50s，72℃延伸5min，32个循环，最后72℃延伸10min，12℃保存。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增产物采用0.8％～1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测，纯合粳性单株只扩增出850bp条带，杂合粳性单株同时扩增出850bp和550bp条带，纯合糯性植株只扩增出550bp条带。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增产物采用1.0％的琼脂糖凝胶电泳检测。