[发明专利]一种乳制品中乳果糖的检测方法

权利要求书

1.一种乳制品中乳果糖的检测方法，包括如下步骤：

（1）取乳制品样品，用水稀释后，加入亚铁氰化钾溶液、硫酸锌溶液和磷酸盐缓冲溶液，形成样品稀释液，经稀释后加入β-D-半乳糖苷酶恒温培养，加入甲醇，离心分离取上清液加入内标物后氮气吹干；加入甲氧胺溶液反应，再加入N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺，冷却后定容，去除沉淀后得待测液；

（2）使用超高效液相色谱串联质谱仪对检测方法步骤（1）得到的待测液进行检测分析，得到乳果糖含量；

所述步骤（2）中的超高效液相色谱串联质谱仪分析条件为：

流动相：A-0.1甲酸水溶液；B-乙腈；A:B=5:95；

流速：0.5 mL/min；

色谱柱：C₁₈色谱柱；

进样体积：2 μL；

目标待测物离子对信息：570.4 319.3，570.4 103.1；

离子源：电喷雾（ESI+）；

扫描方式：多反应监测（MRM）；

喷雾电压：4500 V；

离子化温度：500 ℃；

去簇电压：56 V；

所述色谱柱的规格为：长度75 mm×内径2.0 mm。

2.根据权利要求1所述的乳制品中乳果糖的检测方法，步骤（1）中的乳制品为巴氏杀菌乳，UHT乳品，生鲜乳或其他乳制品。

3.根据权利要求1或2所述的乳制品中乳果糖的检测方法，步骤（1）中，β-D-半乳糖苷酶与样品稀释液的体积比为1:1-5。

4.根据权利要求1或2所述的乳制品中乳果糖的检测方法，步骤（1）中加入β-D-半乳糖苷酶后反应温度为45℃-55℃；培养时间0.5-2h。

5.根据权利要求1或2所述的乳制品中乳果糖的检测方法，所述步骤（1）中的亚铁氰化钾溶液的浓度为100-150g/L，与乳制品样品的体积比为2:1-5。

6.根据权利要求1或2所述的乳制品中乳果糖的检测方法，硫酸锌溶液浓度为168 g/L，与乳制品样品的体积比为2:1-5。

7.根据权利要求1或2所述的乳制品中乳果糖的检测方法，所述步骤（1）中甲醇稀释液氮气吹干后，加入的甲氧胺浓度为10-20 mg/mL，甲氧胺溶液相对于溶液中乳果糖的量是过量的。

8.根据权利要求1或2所述的乳制品中乳果糖的检测方法，步骤（1）中，加入甲氧胺后反应温度为30℃-40℃，反应时间为1-1.5h。

9.根据权利要求1或2所述的乳制品中乳果糖的检测方法，步骤（1）中，所述步骤（1）中加入的衍生化试剂N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺与乳制品样品的体积比为1:50-100。

10.根据权利要求1或2所述的乳制品中乳果糖的检测方法，加入N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺后反应温度为30℃-40℃，反应时间为0.5-1.5h。

11.根据权利要求1所述的乳制品中乳果糖的检测方法，所述步骤（1）中所加入的内标物为木糖。

12.根据权利要求1所述的乳制品中乳果糖的检测方法，所述步骤（1）中通过过滤去除沉淀，所述过滤采用的是0.22 μm有机相滤膜。

13.根据权利要求1或2所述的乳制品中乳果糖的检测方法，所述步骤（2）中的乳果糖的含量采用内标法定量。