[发明专利]一种促进间充质干细胞定向分化的方法

权利要求书

1.一种促进间充质干细胞成骨分化的方法，其特征在于，包括：

采用DMEM培养基培养间充质干细胞，细胞复苏后于6孔板中贴壁培养，每隔2d用0.25%胰酶消化并传代；

将培养得到间充质干细胞接种到分化培养基上，进行诱导分化培养；

所述分化培养基包括：胰岛素3~5μg/ml，转铁蛋白0.05~0.08μg/ml，生长激素1~3ng/ml、谷胱甘肽80~100μg/ml、L-谷氨酰胺 0.5~2mM，β-巯基乙醇20~50μM，丙酮酸钠0.5~0.7mM，非必须氨基酸0.05~0.1mM，纳米三氧化二铁8~12μM，余量为DMEM培养基；

所述纳米三氧化二铁的制备方法为：

取硝酸铁20~25质量份，硝酸银1~3质量份，氢氧化钠15~20质量份，改性碳纳米管3~5质量份；

将硝酸铁溶解于40倍量无水乙醇中，将硝酸银溶解于50倍量的去离子水中，将硝酸银的水水溶液同硝酸铁的乙醇溶液混合，得到混合液；将氢氧化钠溶解于5倍量的去离子水，得到氢氧化钠溶液，将氢氧化钠溶液同混合溶液混合，搅拌，超声20min，加热至150摄氏度，保温反应12h，取产物，用去离子水和无水乙醇多次洗涤，干燥后在600~800摄氏度下烧结2h，得到粉体；

将粉体同改性碳纳米管共同球磨2h，球磨过程中加入去离子水，得到浆液，烘干浆液，得到干燥的产物，将产物在400~600摄氏度下煅烧，得到纳米三氧化二铁；

所述改性碳纳米管的改性方法为：

取碳纳米管1~2质量份，二甲基甲酰胺200~400质量份，乙酸锌5~10质量份；

将碳纳米管在500~600摄氏度下烧蚀3h，烧蚀后用硝酸回流酸洗后，再用去离子水洗涤至滤液呈中性；

将烧蚀后的碳纳米管分散到二甲基甲酰胺中，超声1h后搅拌，在搅拌状态下缓慢加入乙酸锌，再次超声2h，得到的溶液转移至水热反应釜中加入10~15h，加热温度为60~90摄氏度，得到产物；

将所得产物用乙醇和去离子水交替洗涤5~8次，得到改性碳纳米管。

2.根据权利要求1所述的一种促进间充质干细胞成骨分化的方法，其特征在于，所述分化培养基包括胰岛素4~5μg/ml，转铁蛋白0.06~0.08μg/ml，生长激素2~3ng/ml、谷胱甘肽90~100μg/ml、L-谷氨酰胺 1.5~2mM，β-巯基乙醇25~50μM，丙酮酸钠0.6~0.7mM，非必须氨基酸0.08~0.1mM，纳米三氧化二铁10~12μM，余量为DMEM培养基。

3.根据权利要求2所述的一种促进间充质干细胞成骨分化的方法，其特征在于，所述分化培养基包括胰岛素4μg/ml，转铁蛋白0.06μg/ml，生长激素2ng/ml、谷胱甘肽90μg/ml、L-谷氨酰胺 1.5mM，β-巯基乙醇25μM，丙酮酸钠0.6mM，非必须氨基酸0.08mM，纳米三氧化二铁10μM，余量为DMEM培养基。

4.根据权利要求1所述的一种促进间充质干细胞成骨分化的方法，其特征在于，取硝酸铁21~25质量份，硝酸银2~3质量份，氢氧化钠17~20质量份，改性碳纳米管4~5质量份。

5.根据权利要求4所述的一种促进间充质干细胞成骨分化的方法，其特征在于，取硝酸铁21质量份，硝酸银2质量份，氢氧化钠17质量份，改性碳纳米管4质量份。

6.根据权利要求1所述的一种促进间充质干细胞成骨分化的方法，其特征在于，取碳纳米管1.5~2质量份，二甲基甲酰胺300~400质量份，乙酸锌8~10质量份。

7.根据权利要求6所述的一种促进间充质干细胞成骨分化的方法，其特征在于，取碳纳米管1.5质量份，二甲基甲酰胺300质量份，乙酸锌8质量份。