[发明专利]使用糖基转移酶对甜菊糖苷类化合物进行糖基化方法有效

申请号：	202010211656.3	申请日：	2020-03-24
公开（公告）号：	CN111424065B	公开（公告）日：	2022-08-16
发明（设计）人：	王靖;李皓然;王小艳;郭元亨;陈博;丁子元;祁飞;刘瑞敏;李晨晨;李帅朋;孙绍鹏	申请（专利权）人：	金禾益康(北京)生物科技有限公司
主分类号：	C12P19/56	分类号：	C12P19/56
代理公司：	北京信慧永光知识产权代理有限责任公司 11290	代理人：	王芬;张淑珍
地址：	102209 北京市昌平区北七家镇未***	国省代码：	北京;11
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摘要：
搜索关键词：	使用糖基转移酶甜菊糖化合物进行糖基化方法
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【权利要求书】：

1.一种糖基化方法，所述方法包括使用来源于向日葵的糖基转移酶UGT-76在甜菊糖苷类化合物的O-(Glc)n的第一个糖基的C-3’上添加β-葡萄糖苷而进行糖基化，其中，n为2，其中，所述糖基转移酶UGT-76为由如SEQ ID No：1所示的氨基酸序列组成的来源于向日葵的糖基转移酶UGT-76。

2.如权利要求1所述的方法，所述方法为体外糖基化的方法，所述体外糖基化的方法包括：步骤(1)，在第一葡萄糖基转移酶存在下，将葡萄糖基供体的糖基转移到甜菊糖苷类化合物的O-(Glc)n的第一个糖基的C-3’上，从而形成第一糖基化产物，其中，n为2，所述葡萄糖基转移酶为由如SEQ ID No：1所示的氨基酸序列组成的来源于向日葵的糖基转移酶UGT-76。

3.如权利要求2所述的方法，其中，所述甜菊糖苷类化合物选自于由以下所组成的组中的一种或多种：

甜菊醇双糖苷、甜菊糖苷、甜菊糖莱鲍迪苷D和甜菊糖莱鲍迪苷E。

4.如权利要求2或3所述的方法，所述方法进一步包括步骤a：在第二葡萄糖基转移酶的存在下，将葡萄糖基供体的糖基转移到所述甜菊糖苷类化合物和/或所述第一糖基化产物的COO-Glc的C-2’上，从而得到第二糖基化产物，其中，所述第二葡萄糖基转移酶为由如SEQID No：3所示的氨基酸序列组成的来源于斯塔摩酵母的糖基转移酶UGT-91。

5.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述甜菊糖苷类化合物为选自于由以下所组成的组中的一种或多种：存在于天然植物中的甜菊糖苷类化合物、提取的甜菊糖苷类化合物、和合成的甜菊糖苷类化合物；和/或，所述葡萄糖基供体选自于由以下所组成的组中的一种或多种：UDP-葡萄糖、ADP-葡萄糖、TDP-葡萄糖、CDP-葡萄糖或GDP-葡萄糖或其组合。

6.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述第一和/或第二葡萄糖基转移酶的用量为2000～10000U/L。

7.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述第一和/或第二葡萄糖基转移酶的用量为3000～8000U/L。

8.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述第一和/或第二葡萄糖基转移酶的用量为3000～5000U/L。

9.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述第一和/或第二葡萄糖基转移酶的用量为4000～5000U/L。

10.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述甜菊糖苷类化合物和/或所述第一糖基化产物的起始浓度为0.1～100g/L。

11.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述甜菊糖苷类化合物和/或所述第一糖基化产物的起始浓度为1～60g/L。

12.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述甜菊糖苷类化合物和/或所述第一糖基化产物的起始浓度为10～60g/L。

13.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述甜菊糖苷类化合物和/或所述第一糖基化产物的起始浓度为30～60g/L。

14.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述葡萄糖基供体的起始浓度为0.065～65g/L。

15.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述葡萄糖基供体的起始浓度为0.65～40g/L。

16.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述葡萄糖基供体的起始浓度为6.5～40g/L。

17.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述葡萄糖基供体的起始浓度为20～40g/L。