[发明专利]一种快速有效评估体外受精结局的无创检测方法

说明书

本发明提供一种快速有效评估体外受精结局的无创检测方法，包括以下步骤：将获得的精子在培养液中进行精子调配；将调配好的预进行受精的培养液滴入至培养皿中，每个培养皿准备多个预受精培养液滴；将取出的单个卵子分别注入至每个预受精培养液滴中，培养4‑5个小时；深入受精滴中吸取部分体积的受精滴，离心，取上清液稀释；将稀释后的受精滴利用全自动生化分析仪检测钙离子浓度；统计受精滴中钙离子浓度差异，以此预测0PN结局和/或2PN结局的差异。本研究收集最初4‑5小时换液的受精滴（Day 0）进行早期检测，研究结果可直接预测2PN阶段（Day 1）的受精结局，有助于提高临床早期判断受精结局，对下一步诊治提供指导。

技术领域

本发明涉及临床辅助生殖技术，特别涉及一种快速有效评估体外受精结局的无创检测方法。

背景技术

体外受精和胚胎移植(IVF-ET)俗称“试管婴儿”。其是一种特殊的临床辅助生殖技术，需要把精子和卵子在体外的环境下完成受精过程，然后将受精的早期胚胎移植到女性的子宫内，在女性子宫内发育成为胎儿，也就是俗称的试管婴儿。在此过程中，是否受精是最初也是最为关键的一步，如果可以快速准确的评估受精结局，就能在最佳的时间给予患者补救的措施，从而减少患者的精神及经济压力。目前临床评估受精结局的主要方法是胚胎实验员通过显微镜观察胚胎发育的形态，在最初的4-5小时可以观察，如果观察到2PB的数量超过体外培养数量的三分之一则等待次日继续动态观察受精结局，如果观察到2PB数量小于体外培养数量的三分之一则延长观察时间至6-8小时，根据观察结果确定是否需要行早期补救。当在次日观察到2PN则初步判定受精正常。但目前的体外受精结局的检测方法是胚胎实验员对精卵结合情况的实时观察。胚胎实验员主要是显微镜观察进行形态学评估，其受观察者的主观性影响很大，并且无法检测到一些隐藏的不能肉眼可见的异常，形态学评分高的胚胎不能代表最佳的发育潜能，所以体外受精结局的预测有限。

发明内容

本发明为解决上述技术问题提供一种快速有效评估体外受精结局的无创检测方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种快速有效评估体外受精结局的无创检测方法，包括以下步骤：

将获得的精子在培养液中进行精子调配；

将调配好的预进行受精的培养液滴入至培养皿中，每个培养皿准备多个预受精培养液滴；

将取出的单个卵子分别注入至每个预受精培养液滴中，培养4-5个小时；

深入受精滴中吸取部分体积的受精滴，离心，取上清液稀释；

将稀释后的受精滴利用全自动生化分析仪检测钙离子浓度；

统计受精滴中钙离子浓度差异，以此预测0PN结局和/或2PN结局的差异。

上述方案中，所述检测钙离子浓度的方法为偶氮砷III法。

上述方案中，离心步骤具体为在4℃，3000rpm离心5分钟。

上述方案中，0PN的钙离子浓度为1.72±0.6mmol/L。

上述方案中，2PN的钙离子浓度为1.62±0.4mmol/L。

上述方案中，调配好的预进行受精的培养液滴中精子的浓度为15万条/mL。

上述方案中，取上清液稀释是使用的去离子水稀释。

本发明与现有技术相比具有如下有益效果：本研究仅通过收集当天最初4-5小时(Day 0)换液的受精滴进行早期检测，研究结果可直接预测现有技术需要第二天才能观察到的2PN阶段(Day 1)的受精结局，有助于提高临床早期判断受精结局，对下一步诊治提供指导。

具体实施方式