[发明专利]DNA编码分子库的筛选方法和试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种DNA编码分子库的筛选方法，包括：提供第一复合物和目标靶点，第一复合物包括依次连接的第一DNA、可切断基团以及能够特异性结合目标靶点的配体；将第一复合物与目标靶点孵育，得到第二复合物；提供DNA编码分子库，DNA编码分子库中的编码化合物含有第二DNA，第二DNA与第一DNA间存在互补碱基序列；将DNA编码分子库与第二复合物孵育，得到第一混合体系；提供切断试剂，将切断试剂与第一混合体系孵育，分离，获得第二混合体系；将第二混合体系进行变性解离，获得解离产物，分析解离产物中的DNA序列信息，根据DNA序列信息确定目标编码化合物。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种DNA编码分子库的筛选方法和试剂盒。

背景技术

当代药物研发中，针对疾病的药物靶点，通过构建大型的候选药物分子库，进行高通量、大规模筛选是新药研发中不可或缺的手段。当今世界上主要的制药公司均拥有大型的分子库和大规模的筛选平台用于新药研发，然而，传统的分子库和筛选平台成本高昂、技术门槛高、管理运行复杂，成为严重制约高通量筛选发展和应用的问题。

近年来，DNA编码分子库技术逐渐发展起来，成为药物研发中的新兴筛选方法。在DNA编码分子库中，每一个化合物与一个特异性的DNA片段相连接，该DNA片段成为了特异于该化合物的条形码，从而实现对化合物的特异性编码。DNA编码分子库能够在极小的体系中，实现千万乃至上千亿级的高通量筛选，筛选结果可以通过PCR扩增和DNA测序进行解码分析，从而推断出相应的化合物结构，来获得苗头化合物以应用于进一步药物研发。DNA编码分子库已得到新药研发领域中的广泛认可和应用，成为新药研发中的一种重要支撑技术。

然而，现有使用DNA编码分子库进行药物筛选的方法存在诸多缺陷，一些方法中，所使用的靶点大部分为纯化后的蛋白质，或为经修饰后的蛋白质靶点固载在磁珠之类的固相载体之上形成的固载蛋白，这限制了DNA编码分子库的应用范围，导致其它与疾病体系更加接近、更加具有生物相关度的药物靶点，例如膜蛋白、蛋白质复合体、活细胞、病理组织等，由于较难或无法纯化和固载，而不能够用于DNA编码分子库的筛选，成为本领域的一个瓶颈问题。而例如膜蛋白、蛋白质复合体、活细胞、病理组织等药物靶点，反而是与疾病体系更加接近，更加具有生物相关度，是更有价值的药物筛选靶点。而以不需要被专门过表达的，更加接近生理状态的活细胞作为药物筛选的靶点一直是本领域尚未解决的一个难点。

一些方法中，先采用设置有交联基团的DNA片段标记目标靶点，然后利用该DNA片段与DNA编码分子库中的DNA分子互补，实现化合物分子的筛选，然而，由于该方法采用共价交联的方式标记目标靶点，且后续需要采用强烈变性条件进行洗脱，对活细胞上的靶点的活性造成较大影响。

发明内容

本发明的目的在于提供一种DNA编码分子库的筛选方法和试剂盒。为实现该发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种DNA编码分子库的筛选方法，包括以下步骤：

提供第一复合物和目标靶点，所述第一复合物包括依次连接的第一DNA、可切断基团以及能够特异性结合所述目标靶点的配体；将所述第一复合物与所述目标靶点孵育，得到第二复合物；

提供DNA编码分子库，所述DNA编码分子库中的编码化合物含有第二 DNA，所述第二DNA与所述第一DNA间存在互补碱基序列；将所述DNA编码分子库与所述第二复合物孵育，得到第一混合体系；

提供切断试剂，将所述切断试剂与所述第一混合体系孵育，分离，获得第二混合体系；

将所述第二混合体系进行变性解离，获得解离产物，分析所述解离产物中的DNA序列信息，根据所述DNA序列信息确定目标编码化合物。