[发明专利]一种应用流式细胞术检测血小板抗体特异性的方法及检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种应用流式细胞术检测血小板抗体特异性的方法，包括如下步骤：（1）血小板抗原特异性荧光微球的制备；（2）检测抗体的制备；（3）血小板对照品的制备（4）检测反应体系；（5）待测样本检测。本发明的另一目的在于提供一种应用流式细胞术检测血小板抗体特异性的检测试剂盒，包括由不同的抗血小板特异性糖蛋白抗体包被在不同的荧光微球表面得到的血小板抗原特异性荧光微球、微球缓冲液、血小板对照品、血小板裂解液、清洗液、校准微球以及检测抗体。所述的血小板特异性抗体检测方法，解决了现有技术中的血小板抗体检测主要针对被检测者自身血小板抗体，并非血浆或血清中游离的血小板抗体的问题，同时可以更近一步地确定被检测者存在抗体的血小板特异性抗原（HPA）的类型，并且本发明所述方法样本用量少、结果更加准确、步骤简单、易操作、效率更高。

技术领域

本发明属于免疫诊断检测领域，具体涉及一种应用流式细胞术对血小板抗体特异性进行检测的方法及检测试剂盒。

背景技术

血小板抗体是患者在输血、妊娠或移植等过程中接触外来血小板抗原所产生的致病性抗体，可致敏血小板并使其遭到破坏，引起血小板减少，导致血小板输注无效症（plalelet transfusion refractoriness, PTR），胎母同种异体免疫血小板减少症（foetal-maternal alloimmune thromLocyte penia, FMAIT），输血后紫癜（posttransfusion purpura, PTP），以及移植相关同种异体免疫血小板减少症（transplantation-associated alloimmune thrombocytopenia, TAAT）等多种病症，患者易出现淤点、瘀斑及出血等症状，严重者甚至会发生死亡。免疫性疾病患者在机体免疫系统紊乱的情况下亦可产生针对自身血小板的抗体，导致自身免疫性血小板减少症（idiopathic thrombocytopenia, ITP）。血小板抗体包括HLA I类抗体及抗血小板糖蛋白或HPA抗体。临床血小板相关免疫性疾病患者体内通常能检出抗HLA Ⅰ类抗体。但血小板更多的是由抗GP或HPA抗体等多种抗体共同作用，包括抗GP IV、抗GP Ⅱb/Ⅲa、抗GP Ⅰa/Ⅱa、抗GP Ⅰb/Ⅸ、抗CD109抗体等。

流式细胞术是近些年发展起来的新技术，能够对一个样本进行多参数高通量检测，检测速度快、精度高、准确性好。CBA（cytometric bead array）即微量样本多指标流式蛋白定量技术，是一种基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。CBA是流式细胞术的进阶版，利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒—“捕获微球-待测物-检测抗体夹心复合物”所散发的荧光，从而测定待测物的数量，这种方法对样本需求量更少，检测更快速、更准确。

目前，已有的检测血小板抗体方法和试剂盒主要针对患者体内的自身血小板抗体，即与患者血小板表面抗原结合的抗体。该检测方法主要应用在自身免疫性血小板减少症患者体内的自身血小板抗体检测，而临床血小板较少症患者大多数为同种异体免疫性疾病患者，此类患者也需要检测的是血液中或血浆中游离的血小板抗体（即非自身血小板抗体）。更进一步的，目前针对被检测者体内存在具体某种血小板特异性抗原（HPA）的抗体在临床上的检测方法更是数量稀少。根据上述情况，需要一种方法检测被检测者的血液或血浆中游离的血小板抗体，同时具体到某种HPA的抗体，且该方法需要具有特异性高、灵敏度好、操作简便、检测快速等特点。因此，研发一种快速且特异性高的血小板抗体特异性检测方法及试剂盒具有很大的必要性。。

发明内容

通过本发明所述的检测方法与试剂盒，能够快速地检测出待测样本中血小板特异性抗体。

为实现上述目的，通过以下方法及步骤实验：

一种血小板抗体特异性检测方法，包括如下步骤：

血小板抗原特异性荧光微球的制备