[发明专利]一种应用于畜禽粪便发酵的菌剂组合及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种应用于畜禽粪便发酵的菌剂组合，其特征在于，该菌剂组合是由四种益生菌：布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri），地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）BNQ-5，植物乳杆菌（Lactobacillus Plantarum）BNQ-32，产朊假丝酵母（Candida utilis），在四种增效培养液中混合发酵，采用菌体保护剂和菌液吸附物料，制成分别针对鸡粪、猪粪、羊粪和牛粪发酵的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ号四种菌剂，所述地衣芽孢杆菌BNQ-5、植物乳杆菌BNQ-32已送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号分别为CGMCC NO.19358、CGMCCNO.19359，所述布氏乳杆菌和产阮假丝酵母购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号分别为：CICC No. 20293和CICC No.1314。

2.根据权利要求1所述的一种应用于畜禽粪便发酵的菌剂组合，其特征在于，所述的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ号菌剂中有效活菌数不小于1.0×10¹⁰CFU/g。

3.一种应用于畜禽粪便发酵菌剂组合的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)菌种活化复壮：

①菌种：布氏乳杆菌，编号为CICC 20293，地衣芽孢杆菌BNQ-5，编号为CGMCCNO.19358，植物乳杆菌BNQ-32，编号为CGMCC NO.19359，产朊假丝酵母，编号为CICC 1314；

②基础培养基：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，磷酸氢二钾2g/L，柠檬酸二铵2g/L，乙酸钠5g/L，吐温80 1g/L，硫酸镁0.60g/L，硫酸锰0.25g/L,pH 6.2-6.4，121℃，灭菌20min；

③将布氏乳杆菌，地衣芽孢杆菌BNQ-5，植物乳杆菌BNQ-32，产朊假丝酵母混合培养活化，30-35℃，静置培养24h，制成混合发酵菌液；

(2)菌液扩大培养：

①增效培养液：向步骤(1)基础培养基组分中分别加入10％-15％的鸡粪干粉，10％-15％猪粪干粉，10％-15％羊粪干粉，10％-15％牛粪干粉，对应得到四种增效培养液：Ⅰ号培养液，Ⅱ号培养液，Ⅲ号培养液，Ⅳ号培养液；

②放大发酵过程：将步骤(1)中的混合发酵菌液按照0.5-1：20比例分别加在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ号培养液中培养，35℃，静置培养24h，分别得到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ号发酵菌液；

(3)离心处理：将步骤(2)的四种发酵菌液离心分别得到上清液和菌泥；

(4)保护剂及吸附物料加入：将菌泥量1/10的茶多糖和1/10的脱脂奶粉用适量的离心上清液混匀，向混匀液中加入10％的吸附物料，连同得到的菌泥，缓慢搅拌10分钟，使菌泥均匀吸附在吸附物料上；

(5)低温干燥：将4种吸附有菌液的吸附物料置于低温干燥箱中，低温烘干，得到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ号菌剂。

4.根据权利要求3所述的一种应用于畜禽粪便发酵菌剂组合的制备方法，其特征在于，步骤(2)中的鸡粪干粉、猪粪干粉、羊粪干粉及牛粪干粉是将鸡粪、猪粪、羊粪、牛粪分别晾晒，烘干，粉碎，灭菌得到粉碎原料。

5.根据权利要求3所述的一种应用于畜禽粪便发酵菌剂组合的制备方法，其特征在于，步骤(4)中的茶多糖是茶多酚生产过程中，将茶多酚被萃取后的水相，经浓缩、干燥、粉碎、灭菌，得到茶多糖粉末。

6.根据权利要求3所述的一种应用于畜禽粪便发酵菌剂组合的制备方法，其特征在于，步骤(4)中的吸附物料是由玉米淀粉和麸皮等比例混合，磨碎成粉，过30目筛，经灭菌、烘干得到。

7.一种按照权利要求3所述制备方法制备得到菌剂的使用方法，其特征在于，所述Ⅰ号菌剂适用于鸡粪，Ⅱ号菌剂适用于猪粪，Ⅲ号菌剂适用于羊粪，Ⅳ号菌剂适用于牛粪。