[发明专利]一种益智高效再生体系建立的方法

说明书

本发明公开了一种益智高效再生体系建立的方法，该方法包括外植体采集与消毒、单芽诱导、丛生芽诱导、丛生芽增殖、壮苗培养、生根培养、生根苗炼苗和生根苗移栽。本发明工艺流程简单，瓶苗生长整齐健壮，增殖倍率高且稳定，生根苗移栽成活率高，苗木定植后生长结果良好，实现了益智离体高效再生，适用于益智商业化育苗生产。

技术领域

本发明涉及一种基于益智离体培养技术的高效再生体系建立方法，属于作物栽培与生理生化领域。

背景技术

益智（Alpinia oxyphylla Miq），又名益智仁、益智子，属姜科山姜属多年生草本植物。益智为传统南药，以干燥果实供药用，有益脾胃，理元气，补肾虚滑沥的功用。治脾胃（或肾）虚寒所致的泄泻，腹痛，呕吐，食欲不振，唾液分泌增多，遗尿，小便频数等症。主要分布于广东、广西、海南，在云南和福建有少量分布。益智为半阴生植物，生长适宜郁闭度为30%~50%，可在橡胶林、油茶林及其他林木下种植，在保证林农经济利益前提下，有效缩短非投产期，具备良好的推广应用前景。

益智种苗繁殖通常采用种子繁殖和分株繁殖的方式。异花授粉植物实生苗性状分离严重，个体差异大；分株繁殖虽然能保持母本优良性状，但繁殖系数极低，不能在短时间内繁殖出大量种苗，满足不了种苗市场需求。益智高效离体再生体系，以益智优良单株笋芽为原始材料，通过诱导丛生芽增殖成苗，将优良单株无性系化，有效保证了苗木的遗传稳定性，每月增殖倍数可达3.5~4.0倍，有利于益智良种苗木稳定生产和集约化经营。

发明内容

本发明的目的是提供一种益智高效再生体系建立的方法，该方法可实现益智优势单株无性系化、良种苗木稳定快速繁殖。

为达到目的，本发明提供的一种益智高效再生体系建立的方法，该方法包括以下步骤：

1）外植体采集与消毒：选择生长结果良好的益智优势单株，于晴天正午挖取益智未展叶笋芽，去土去根，在笋芽苞片与姜块交界处切断，保湿带回实验室；将采集的外植体置于饱和漂白粉溶液中浸泡25~35min，无菌水漂洗2次，转移至0.1%升汞溶液处理15~25min，使用无菌水漂洗4次以上，将漂洗干净的外植体进行第二次切割，将笋芽外层苞片剥离，切除接触升汞溶液的部分，从中轴纵切成两半，接种到空白MS培养基；该培养基附加蔗糖30g/L、卡拉胶6g/L，灭菌前pH调节为5.8，灭菌温度121℃、压力1.1 kg/cm²、灭菌时间20min，培养环境为温度27℃±1℃，光照1500~2000lx，光照时间为12h/d；

2）单芽诱导：笋芽经过10~15d培养，剔除污染，将无菌笋芽接种到配方为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1 mg/L的启动培养基培养，培养时间30d；

3）丛生芽的诱导：将步骤2）获得的生长状况良好的单芽接种取出，在无菌条件下切除单芽基部愈伤组织，将单芽转接至丛生芽诱导培养基；接种30d后，将原接种单芽纵切为带一半原单芽及部分不定芽的组织块，剔除愈伤组织后，转移至相同培养基，继续培养30d形成密集的丛生芽；

4）丛生芽增殖：将步骤3）获得的密集丛生芽，切割为带5~8个不定芽的组织块，接种至丛生芽增殖培养基；培养30d后，原接种组织块体积迅速增加，不定芽形成1.5~2cm且生长健壮的丛生芽，丛生芽高生长同时，基部形成较多的不定芽，实现迅速增殖；丛生芽增殖30d继代转接1次，整个繁育周期共重复继代15~20次；

5）壮苗培养：将步骤4）获得的健壮丛生芽，切割为带3~5个健壮单芽的组织块，接种至壮苗培养基，培养30d；

6）生根培养：将步骤5）获得的单芽切割分级，植株高度在3.0~4.0cm的单芽接种至生根培养基，植株高度小于3.0cm的单芽重新接种至步骤5）壮苗培养基；生根苗接种后1~15d，光照12h/d；接种后16~30d，光照14h/d；