[发明专利]GM-CSF精准持续给药治疗小鼠阿尔茨海默病的方法

说明书

本发明公开了GM‑CSF精准持续给药治疗小鼠阿尔茨海默病的方法，包括以下步骤方法，步骤一：对小鼠的侧脑室或其他脑内用药位置植入；步骤二：对小鼠的脊髓蛛网膜下腔植入；步骤三：对小鼠注入药物后进行监测。该方法是一种治疗阿尔茨海默病小鼠的实验方法，方法设计安全可靠，通过这种手术我们可将设备植入小鼠脑内、海马内或脊髓蛛网膜下腔内任何深度、任何位置，并且可以单侧或双侧植入，可保证跨血脑屏障药物输入的持续稳定，该实验方法同样适用于其他大分子药物的小鼠脑内用药需求，提供简易安全稳定的小鼠脑内用药技术手段，适合推广使用。

技术领域

本发明涉及生物医疗技术领域，具体为GM-CSF精准持续给药治疗小鼠阿尔茨海默病的方法。

背景技术

阿尔茨海默病是常见的神经退行性颅内疾病，其特征性病理改变为β-淀粉样蛋白(Amyloid β-protein，Aβ)的沉积导致的老年斑、tau蛋白异常聚集形成纤维缠结及神经元缺失和胶质细胞增生，目前没有有效的治疗药物。粒细胞巨噬细胞刺激因子(Granulocyte-macrophage Colony-stimulating Factor，GM-CSF)可刺激小胶质细胞吸收小鼠大脑中的淀粉样蛋白达到治疗目的。

而GM-CSF为一种糖蛋白，原核细胞表达的分子量为14.5kDa，真核细胞表达的分子量为22kDa，难以通过血脑屏障，一般用药方式难以将GM-CSF送入小鼠脑内，评估治疗疗效。我们采用显微立体定向手术方法，在试验小鼠颅外皮下安装渗透型微型泵，并能精准地将注射器埋置在双侧脑室内、脊髓蛛网膜下腔、双侧海马区等位置，达到小鼠脑室内、鞘内、病灶内持续稳定的GM-CSF药物浓度。

针对以上这个问题就需要对传统的方法进行改进，那么如何发明出GM-CSF精准持续给药治疗小鼠阿尔茨海默病的方法，这成为我们需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供GM-CSF精准持续给药治疗小鼠阿尔茨海默病的方法，解决了背景技术中所提出的问题。

为解决上述问题，本发明提供如下技术方案：GM-CSF精准持续给药治疗小鼠阿尔茨海默病的方法，包括以下步骤方法，

步骤一：对小鼠的侧脑室或其他脑内用药位置植入；

步骤二：对小鼠的脊髓蛛网膜下腔植入；

步骤三：对小鼠注入药物后进行监测。

作为本发明的进一步优选方式，步骤一中，根据阿尔茨海默病小鼠体重，按照400mg/kg水合氯醛的剂量，抽取相应量的8％水合氯醛腹腔注射麻醉，麻醉满意，待小鼠平稳入睡后将立体定位仪不锈钢耳杆插入小鼠耳洞中，固定牢靠，确保两侧位置准确对称，以颅平位将小鼠固定在立体定位仪上，碘伏消毒小鼠双眼后方、双耳前方头皮，剪去部分头皮，钝性撕开头皮下筋膜，暴露颅骨，棉球蘸少量3％过氧化氢溶液腐蚀掉颅骨表面的软组织，直至颅骨表面发白，前囟后囟清晰可见，在颅骨上钻两个孔，前囱后O.3mm、中线旁开1mm处，植入导管，深度为2.5mm，与侧脑室相对应，其他脑内靶点用药可根据需要更改靶点位置，以生物胶固定在头盖骨上，用显微手术剪刀在小鼠的背部游离出一个皮下的腔隙，插入渗透式微型泵连接导管，缝合切口，4周后可给与更换渗透式微型泵连接导管。

作为本发明的进一步优选方式，步骤二中，根据小鼠体重，按照400mg/kg水合氯醛的剂量，抽取相应量的8％水合氯醛腹腔注射麻醉，在小鼠的背部游离皮下的腔隙,找到最突出的L6棘突，轻轻按压将棘突周围组织固定，将针头插入L5-L6椎间隙凹槽内，并观察尾部甩尾，有甩尾表示针头已成功进入硬膜内腔，缝扎固定导管，连接渗透式微型泵，置于皮下腔隙，缝合切口，4周后可给与更换型渗透式微型泵连接导管。

作为本发明的进一步优选方式，步骤三中，实验小鼠治疗前后分别进行开放旷场实验、避暗实验和Morris水迷宫实验，行为学测试结束后可对小鼠进行影像学检查，全部完成后处死，留取脑组织可进行免疫组化，Western blots检测信号分子表达其它实验。