[发明专利]红斑狼疮分型的皮肤组织免疫细胞原位检测试剂盒的应用

说明书

本发明公开了用于红斑狼疮分型的皮肤组织免疫细胞原位检测试剂盒及其应用。本试剂盒运用原位多标记免疫染色及多光谱成像技术可检测CD4、CD8、CD19、CD11b这四种分子标记。CD4‑CD8‑CD19‑CD11b的四联检测结果能很好的区分盘状红斑狼疮（DLE）、亚急性红斑狼疮（SCLE）、系统性红斑狼疮（SLE）与健康对照，配合CD19的单阳检测结果和/或CD8‑CD19的二联检测结果，准确率更高。本发明试剂盒操作简单、经济实用，结果对于区分不同类型红斑狼疮的皮损有较高的特异性，便于其在红斑狼疮机制研究和临床诊断工作中的应用和推广。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及用于红斑狼疮分型的皮肤组织免疫细胞原位检测试剂盒及其应用。

背景技术

红斑狼疮（Lupus erythematosus, LE）是一种多因素参与，严重影响生活质量和危害健康的慢性自身免疫性疾病。80%以上的患者可在发病初始或者进展中出现皮肤受累。LE为一病谱性疾病，一端为皮肤型红斑狼疮（cutaneous lupus erythematosus, CLE）,呈慢性良性经过，病变主要局限于皮肤；另一端为系统性红斑狼疮（systemic lupuserythematosus, SLE），多急性发病，病变可累及多系统，严重者可危及生命。临床上，医生根据红斑狼疮皮损表现和相应组织病理改变，将LE分为急性皮肤型红斑狼疮（acutecutaneous lupus erythematosus, ACLE），亚急性皮肤型红斑狼疮（subacute cutaneouslupus erythematosus, SCLE）和盘状红斑狼疮（discoid lupus erythematosus, DLE）三大类。

DLE是最常见也最典型的一类CLE，临床上50%-85%的有皮肤受累的红斑狼疮患者均表现为持久的盘状皮损。SCLE是红斑狼疮亚型中光敏感性最强的一类CLE，常表现为环状斑块或丘疹鳞屑样皮损。ACLE通常被认为是SLE患者皮肤受累的表现，是红斑狼疮各类型中最为严重的一型，其典型皮损为面部蝶形分布的红斑，绝大多数患者发病时即有多系统受累。临床上，对那些皮损典型的红斑狼疮患者，医生可以进行清晰的诊断分型以及早期精准的干预治疗。但红斑狼疮是一个进行性疾病且受多因素影响，临床上仍有较多患者皮损不典型，难以进行明确的诊断分型，从而导致治疗上的过度用药或病情的延误。因此，红斑狼疮不同亚型的诊断及其鉴别诊断对于临床早期干预和精准治疗至关重要。目前缺少简便快捷、特异性和灵敏度高的红斑狼疮辅助诊断试剂盒。因此建立有效的临床适用的试剂盒就显得尤为重要。

免疫细胞主要包括T淋巴细胞（CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞）、B淋巴细胞、粒细胞、NK细胞、单核/巨噬细胞等。大量研究证实，免疫细胞的异常活化和致病性自身抗体的大量产生在LE的发生发展中其重要作用。有研究发现在DLE皮损中，其炎症浸润区域有大量的B细胞的存在。而SLE和SCLE皮损的炎症浸润相较于正常皮肤则没有表现出明显的B细胞增多。此外，一项不同亚型狼疮皮损与外周血的差异基因表达研究发现，与 NK细胞相关的差异基因仅在DLE皮损中有显著表达，而在SLE皮损和外周血以及DLE外周血中的表达均不明显，提示NK细胞相关基因可能是DLE患者皮肤炎症的特异性基因。已有研究证实细胞毒性CD8⁺T细胞参与了狼疮皮损中表皮基底及血管内皮细胞的凋亡坏死过程，从而导致真表皮交界处及血管周的炎症浸润。