[发明专利]一种灭活型病毒样本RNA保存液及其制备方法

说明书

本发明公开一种灭活型病毒样本RNA保存液及其制备方法，其中保存液包括以下组分：柠檬酸钠、蛋白酶K、浓硫酸、乙二胺四乙酸和硫酸铵，其中柠檬酸钠的终浓度为10mM~35mM，蛋白酶K的终浓度为50~800μg/ml，浓硫酸的终浓度为0.5%~5%（V/V），乙二胺四乙酸的终浓度为5mM~50mM，硫酸铵的终浓度为45%~80%（W/V）。本发明保存液安全无毒、配制简单、使用方便；病毒进入保存液即可使病毒灭活，无须冷藏运输及灭活处理；能在室温下避免RNA降解，可多次冻融而不影响RNA提取的质量；提取过程中也能防止RNA降解，提取的RNA完整性更好，特别适用于有强感染性的流行病毒样本的采集。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种灭活型病毒样本RNA保存液及其制备方法。

背景技术

2019新型冠状病毒（SARS-CoV-2）是2019年在人体中发现的冠状病毒新毒株，该病毒潜伏期具有传染性，所致疾病没有特异治疗方法，对于数量庞大的疑似患者和密切接触者，早发现、早报告、早隔离、早治疗仍是基本的防控措施。新型冠状病毒目前最常用的检测方法是核酸检测，但火速上市的核酸检测试剂盒出现了阴性率高的问题，这个问题可能让漏诊病例助推疫情蔓延。病毒的核酸检测需要经过采样、运输、提取核酸，RT-qPCR检测这些步骤才能最终获得检测结果，每一个步骤都可能出问题而导致结果不准确，如何控制这些环节的出错率，提升检测的准确性和灵敏度，是亟待解决的问题。

根据《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南（第四版）》，在普遍用于新冠病毒样本采集的病毒保存液是可保存病毒活性的等渗盐溶液或磷酸盐缓冲液，里面的成分主要是氯化钠，能保存病毒的活性，但无法抑制RNA的降解。这种病毒保存液存在两个问题，第一个问题是，有活性的病毒使运输和检测人员处于被感染的风险中，特别是采集高传染性、高致病性的病毒（如新型冠状病毒）；第二个问题是，该保存液无法避免RNA的降解，采样后需低温运输，并且不能反复冻融，否则，RNA极易受到RNA酶的降解，这些苛刻的条件使检测更困难，RNA的降解是检测阴性率高的其中一个原因。

因此，开发可灭活病毒并保护RNA免受RNA酶降解的病毒RNA保存液是优化病毒样本采集这一步骤的关键，也是为后续荧光定量或测序检测提供有质量保证核酸的关键。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种灭活型病毒样本RNA保存液及其制备方法，其中保存液安全无毒，使用简单，可常温保存病毒样本，保质期达到1年；病毒样本无须冷藏运输及灭活处理，病毒样本进入保存液即可使病毒灭活，并在室温下有效避免RNA降解，冻存的病毒样本可多次冻融而不影响RNA提取的质量；病毒样本保存液可与大多数RNA分离纯化实验操作兼容，特别适用于有强感染性的流行病毒样本的采集。

本发明的技术方案如下：提供一种灭活型病毒样本RNA保存液，包括以下组分：柠檬酸钠、蛋白酶K、浓硫酸、乙二胺四乙酸和硫酸铵，其中柠檬酸钠的终浓度为10mM~35mM，蛋白酶K的终浓度为50~800μg/ml，浓硫酸的终浓度为0.5%~5%（V/V），乙二胺四乙酸的终浓度为5mM~50mM，硫酸铵的终浓度为45%~80%（W/V）。

进一步地，所述柠檬酸钠的终浓度为15mM~30mM，所述蛋白酶K的终浓度为100~600μg/ml，所述浓硫酸的终浓度为1%~3%（V/V），所述乙二胺四乙酸的终浓度为7mM~30mM，所述硫酸铵的终浓度为50%~70%（W/V）。

进一步地，所述保存液还包括溶剂，所述溶剂为灭菌水。

进一步地，所述保存液的pH值为4.2~6.5。

进一步地，所述保存液的pH值为4.5~5.8。

进一步地，所述保存液的适用样本包括上呼吸道标本、下呼吸道标本、眼结膜拭子、肛拭子、人组织的离体样本、动植物组织的离体样本、人工培养的细胞、血液、体液。