[发明专利]同步检测大黄鱼源肺炎克雷伯菌和金黄杆菌的特异性引物、试剂盒及方法

权利要求书

1.同步检测大黄鱼源肺炎克雷伯菌和金黄杆菌的特异性引物组，其特征在于，包括：

第一上游引物：5'-ATGAAAAAGAGTACTCTGGC-3'；

第一下游引物：5'-TCAGAACTGGTAGGTCATGCC-3'；

第二上游引物：5'-CGCGGATCCATGCAAGATTCAATAGCGGTG-3'；

第二下游引物：5'-CCGCTCGAGTTATTTAGCTTCGAAATAAAC-3'。

2.同步检测大黄鱼源肺炎克雷伯菌和金黄杆菌的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的特异性引物组、10×Buffer、MgCl₂、dNTP Mixture、Taq酶、灭菌的ddH₂O、阳性对照液和阴性对照液；

第一上游引物和第一下游引物的浓度均为10μM；第二上游引物和第二上游引物的浓度均为10μM。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的10×Buffer为2μL；所述的MgCl₂为1μL 25mM的MgCl₂；所述的dNTP Mixture为1μL，dNTP Mixture的浓度为10mM；所述Taq酶为1μL，Taq酶的酶活为5U/μL；所述的灭菌的ddH₂O为1mL。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照液为分别提取的肺炎克雷伯菌和金黄杆菌的基因组DNA；阴性对照液为灭菌水。

5.非诊断目的的同步检测大黄鱼源肺炎克雷伯菌和金黄杆菌的方法，其特征在于，包括：提取待测样品的DNA，以所提取的DNA为模板、采用如权利要求1所述的特异性引物组进行双重PCR，若扩增结果中同时在1053bp和1401bp处扩增出条带，则判定待测样品中含有肺炎克雷伯菌和金黄杆菌；

所述双重PCR的体系为：

10×Buffer 2μL，25mM MgCl₂1μL，10mM dNTP Mixture1μL，10μM的两组上、下游引物各0.5μL；Taq酶；1μL，Taq酶酶活为5U/μL；DNA模板1μL；灭菌水补齐至25μL；

所述双重PCR的反应条件：95℃预变性3min，95℃变性15S，56℃退火30S，72℃延伸1min，30个循环，72℃继续延伸5min，温度降至4℃，进行保存。