[发明专利]抗A型口蹄疫抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株和抗A型口蹄疫抗原单克隆抗体及其应用

权利要求书

1.一种抗A型口蹄疫抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株，其特征在于：分类命名为杂交瘤细胞株XJ14-2F7，保藏编号为CCTCC NO：C201790。

2.如权利要求1所述的抗A型口蹄疫抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株在制备抗A型口蹄疫全病毒检测试剂盒中的应用。

3.一种抗A型口蹄疫抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、制备A型口蹄疫全病毒抗原；

步骤二、A型口蹄疫全病毒抗原免疫Balb/c小鼠；

步骤三、制备SP2/0细胞；

步骤四、制备饲养细胞；

步骤五、从小鼠身上制备待融合的脾淋巴细胞；

步骤六、将1.0×10⁸个脾淋巴细胞和2.0×10⁷个骨髓瘤细胞(购自上海细胞库)进行细胞融合；

步骤七、融合细胞的选择培养：脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成的异核体，即杂交瘤细胞由于具有两种亲代细胞的染色体，从而既可产生原来脾细胞所有的HGPRT(次黄漂呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)，又从骨髓瘤细胞中获得了在组织培养中增殖的特性，因此能在HAT（次黄嘌呤、氨基喋呤、胸腺嘧啶）选择性培养基中存活下来，并不断增殖；

步骤八、阳性杂交瘤细胞株的筛选：待杂交瘤细胞长满孔底1/3-1/2时，换液3-4d后即可取细胞培养上清液100µL，不作稀释用间接ELISA（酶联免疫吸附试验）实验进行特异性抗体的检测，同时用SP2/0细胞培养上清液作阴性对照；免疫后取脾脏细胞进行细胞融合的小鼠血清做阳性对照；检测为阳性的细胞可进行扩大培养，同时选择强阳性的孔进行亚克隆，并注意随时冻存保种；

步骤九、采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行克隆及扩增，最终获得杂交瘤细胞株XJ14-2F7；

步骤十、选择生长旺盛、形态良好的处于对数生长期的细胞进行阳性杂交瘤细胞的冻存。

4.一种抗A型口蹄疫抗原单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的抗A型口蹄疫全病毒抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得。

5.如权利要求4所述的抗A型口蹄疫抗原单克隆抗体在检测A型口蹄疫全病毒中的应用。

6.一种A型口蹄疫检测试剂盒，其特征在于：包含有如权利要求4所述的抗A型口蹄疫全病毒抗原单克隆抗体。