[发明专利]具有胆管转移特性的肝癌模型构建方法及相应细胞

权利要求书

1.一种具有胆管转移特性的肝癌模型构建方法，其包括如下步骤：

S1：对大鼠成体肝干细胞进行扩增、培养并保存；

S2：采用基因转染技术将含有Bmi1基因的慢病毒载体转入大鼠成体肝干细胞，获得稳定过表达Bmi1的大鼠成体肝干细胞；

S3：利用稳定过表达Bmi1的大鼠成体肝干细胞，采用选择连续培养方法进行培养，使其在体外进一步分化，筛选出致瘤能力强及稳定的肝癌细胞；

S4：采用筛选的肝癌细胞，通过动物体内原位肝脏移植瘤模型，可在肝脏形成肝癌且伴胆管癌栓，具有胆管转移特性。

2.如权利要求1所述的方法，其中，步骤S2中，通过基因测序确认所述Bmi1基因插入所述慢病毒载体。

3.如权利要求2所述的方法，其中，步骤S2中，通过PCR和Western blot检测Bmi1过表达效果，建立稳定过表达Bmi1的大鼠成体肝干细胞。

4.如权利要求3所述的方法，其中，步骤S3包括多次重复的选择连续培养方法，每一周期所述选择连续培养内容包括：

a：反复更换细胞培养液，持续时间为4周；

b：细胞培养液采用改良的Richter培养液；

c：每周期培养后需观察细胞形态并记录；

d:每周期培养后将细胞分为三组，一组为用于验证致瘤性的评估组，一组为用于冷冻存样的冻存组，一组为用于下一培养周期的继续培养组。

5.如权利要求4所述的方法，其中，通过观察形态，筛选出形态学上稳定的肿瘤细胞。

6.如权利要求4所述的方法，其中，通过裸鼠皮下成瘤，评估所述评估组细胞的致瘤性，筛选出致瘤能力强的细胞；所述致瘤性包括成瘤率和肿瘤大小。

7.如权利要求4所述的方法，其中，步骤S3中，通过免疫组织化学方法确定裸鼠皮下肿瘤类型为肝癌细胞。

8.一种采用权利要求1-7之一所述方法制备的肝癌细胞。