[发明专利]催化糖链延伸的糖基转移酶突变体及其应用有效
| 申请号： | 202010221972.9 | 申请日： | 2020-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN113444703B | 公开（公告）日： | 2023-09-01 |
| 发明（设计）人： | 周志华;李超静;严兴;王平平;杨成帅 | 申请（专利权）人： | 生合万物（苏州）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12N5/10;C12P33/20 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200233 上海市徐汇区*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 催化 延伸 糖基转移酶 突变体 及其 应用 | ||
1.一种糖基转移酶突变体，所述突变体为：
(a) 氨基酸序列如SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 6或SEQ ID NO: 8所示的蛋白；
(b) (a)所述氨基酸序列两端添加标签序列、信号序列后形成的蛋白。
2.一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码权利要求1所述的糖基转移酶突变体。
3.一种载体，其含有权利要求2所述的多核苷酸，或表达权利要求1所述的糖基转移酶突变体。
4.一种遗传工程化的宿主细胞的用途，用于制备C-6位的糖基上进一步连接一个糖基的四环三萜类化合物；所述遗传工程化的宿主细胞含有权利要求3所述的载体，或基因组中整合有权利要求2所述的多核苷酸，或表达权利要求1所述的糖基转移酶突变体。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述细胞中包括原核细胞或真核细胞；所述的原核细胞包括大肠杆菌细胞、枯草杆菌细胞；所述真核细胞包括植物细胞、真菌细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述植物细胞包括人参细胞或三七细胞。
7.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述宿主细胞还表达原人参三醇型皂苷合成代谢途径中关键酶；
其中，所述的原人参三醇型皂苷包含人参皂苷Rh1；所述的人参皂苷Rh1合成代谢途径中的关键基因包括：达玛烯二醇合成酶基因、细胞色素P450 CYP716A47基因和P450CYP716A47的还原酶基因和四环三萜C6的糖基转移酶UGTPg100，或其组合。
8. 如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述宿主细胞还表达原人参三醇型皂苷合成代谢途径中关键酶；其中，所述的原人参三醇型皂苷包含人参皂苷Rg1；所述的人参皂苷Rg1合成代谢途径中的关键基因包括：达玛烯二醇合成酶基因、细胞色素P450 CYP716A47基因和P450 CYP716A47的还原酶基因和四环三萜C20位和C6的糖基转移酶UGTPg1和UGTPg100，或其组合。
9. 如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述宿主细胞还表达原人参三醇型皂苷合成代谢途径中关键酶；其中，所述的原人参三醇型皂苷包含人参皂苷Rg2；所述的人参皂苷Rg2合成代谢途径中的关键基因包括：达玛烯二醇合成酶基因、细胞色素P450 CYP716A47基因和P450 CYP716A47的还原酶基因和四环三萜C6的糖基转移酶UGTPg100，或其组合。
10. 如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述宿主细胞还表达原人参三醇型皂苷合成代谢途径中关键酶；其中，所述的原人参三醇型皂苷包含人参皂苷Re；所述的人参皂苷Re合成代谢途径中的关键基因包括：达玛烯二醇合成酶基因、细胞色素P450 CYP716A47基因和P450 CYP716A47的还原酶基因和四环三萜C20位和C6的糖基转移酶UGTPg1和UGTPg100，或其组合。
11.权利要求1所述的糖基转移酶突变体的用途，用于在四环三萜化合物C-6位的糖基上连接糖基。
12.权利要求2所述的多核苷酸、权利要求3所述的载体在制备催化制剂中的应用，所述的催化制剂用于在四环三萜化合物C-6位的糖基上连接糖基。
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