[发明专利]一种β-烟酰胺单核苷酸的制备方法

说明书

本发明涉及医药技术领域，提供了β‑烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括A磷酸化反应：在pH 8～10的碱性水溶液中，反应体系温度为25～50℃条件下，将烟酰胺核糖盐与偏磷酸盐进行磷酸化反应2～5h，得到烟酰胺单核苷酸盐的中间产物；B酸化反应：向反应溶液中加酸，调节pH值至3～5，并降低反应体系温度，将烟酰胺单核苷酸盐的中间产物酸化形成β‑烟酰胺单核苷酸；C产物纯化，将步骤B后的反应溶液依次经蛋白膜过滤、高压脱盐膜浓缩、阴离子交换树脂分离纯化、浓缩结晶后得到β‑烟酰胺单核苷酸纯品。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种β-烟酰胺单核苷酸的制备方法。

背景技术

NMN(烟酰胺单核苷酸)是一种有机分子，也是一种核苷酸，人类的不少营养来源均含有这种物质，也是世界上首个经由严谨科学验证可以显著逆转衰老、延长寿命的革命性突破。

烟酰胺单核苷酸抑制衰老作用于2014年由哈佛大学的David Sinclair实验室初步发现,并在2016-2018年间由哈佛医学院、华盛顿大学、日本应庆大学等世界顶尖科研机构分别从提升体能、抑制衰老引起的认知能力下降、逆转血管死亡、保护心脑血管功能等多角度全方位证实其抑制衰老，延长寿命的显著效果。

目前，烟酰胺单核苷酸的大规模合成方法主要是通过酶促反应来实现的(Burgos，E.S等人，Biochemistry，47:11086(2008)；Rozenberg，A等人，J.Org.Chem.,73:9314(2008))。但是酶促反应常常涉及到多种瓶颈，如酶法高昂的成本，反应条件苛刻，生产工艺不稳定，每个批次产品指标相差大，反应产能低等。前期有机合成化学家也做了一些努力，但是效果不理想，反应收率低，工艺复杂，成本高，用到一些有毒试剂，所有这些都严格限制了这些工艺的大规模应用(Jaemoon,L等人，Chem.Commun.,729–730(1999))。此外，发酵方法可能涉及到大家比较敏感的转基因技术，并且反应过程中可能会带来内毒素超标等问题，这给产品的最终应用带来很多隐患。

因此，市场对于开发一种绿色、环保、高效、稳定的烟酰胺单核苷酸合成工艺有着迫切需求。

发明内容

本发明是为解决上述问题进行的，目的在于提供一种β-烟酰胺单核苷酸的制备方法，以克服现有制备工艺存在的工艺不稳定、产品安全存在隐患以及工艺复杂等问题。

本发明中β-烟酰胺单核苷酸的制备工艺概括如下：先将烟酰胺核糖盐(II)在碱性条件下进行磷酸化反应得到烟酰胺单核苷酸盐(III)，然后在酸性条件下酸化得到目标初产物(I)，再经纯化步骤后得到目标产物纯品，反应式如下：

该β-烟酰胺单核苷酸的制备方法，具体包括如下步骤：

A、磷酸化反应

在pH 8～10的碱性水溶液中，反应体系温度为25～50℃条件下，将具有式II结构的烟酰胺核糖盐与偏磷酸盐进行磷酸化反应2～5h，得到具有式III结构的中间产物；

B、酸化反应

向反应溶液中加酸，调节pH值至3～5，并降低反应体系温度，将具有式III结构的中间产物酸化形成具有式I结构的β-烟酰胺单核苷酸；

C、产物纯化

将步骤B后的反应溶液依次经蛋白膜过滤、高压脱盐膜浓缩、阴离子交换树脂分离纯化、浓缩结晶后得到β-烟酰胺单核苷酸纯品。

优选的，在步骤A中，式(III)中的M为钠或钾元素，偏磷酸盐为偏磷酸钠或偏磷酸钾，偏磷酸盐中的三偏磷酸钠含量以P₂O₅计，含量大于68％，1％的水溶液pH值为6.2。

所采用的碱性水溶液为氢氧化钠，氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化钙以及氢氧化镁水溶液中的任意一种。