[发明专利]落叶松黄酮类活性成分磁性分子印迹聚合物的制备方法及萃取方法

说明书

本发明公开了落叶松黄酮类活性成分磁性分子印迹聚合物的制备方法及萃取方法，所述制备方法为将模板原料与有机溶剂、功能性单体混合，然后加入交联剂和引发剂，通氮气，得到聚合物，在真空下通过磁分离和干燥获得反应物料，用索氏提取方法，洗脱除去模板，然后清除残留有机物，干燥，功能性单体为4‑乙烯基吡啶，模板原料为二氢槲皮素，模板原料：功能性单体：交联剂的摩尔比为1∶(2‑6)∶(20‑30)，所述制备方法简单，成本低廉。

技术领域

本发明涉及黄酮类物质的分离纯化技术领域，特别是涉及落叶松黄酮类活性成分磁性分子印迹聚合物的制备方法及萃取方法。

背景技术

当前，随着人们对畜产品安全意识的逐步提高，化药和抗生素污染所导致的食品安全问题和畜禽养殖中“减抗替抗”所面临的严峻挑战，已成为整个社会所关注的焦点问题。由于种类繁多天然本草加上结构类似的活性成分复杂多样，更是对抗呼吸道疾病天然活性成分高效提取和纯化提出了更高的需求。因此，构建分析效率高、特异性强、通量高、方便快捷的天然活性产物筛选提取技术仍然是当今国内外新型兽药研制的关键技术。

西藏落叶松(属于松科)由于其药用有效成分，是高原医学藏药复方中的重要药物，该草本主要分布于西藏高寒地区，具有丰富而独特的活性成分。当前，在高原畜牧业中经常发生抗生素中毒及残留，从天然植物的提取和分离中提取活性成分对于开发新的替代抗生素是至关重要的。西藏落叶松作为藏药的不可缺少部分，不仅具有多种神奇的药效，而且具有低毒、易吸收和利用的作用，常常作为西藏民族药物的主成分。二氢槲皮素是许多植物中重要的黄酮类化合物，常用于藏药的重要评价标准。这种化合物良好的药理活性导致其使用量大大增加，特别是在治疗影响人、牲畜和家禽的困难和复杂的疾病方面，特别在自由基清除、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、杀菌功能等方面发挥着越来越重要的作用。

以往的研究主要是从马尾松、长白山落叶松和樟子松中提取二氢槲皮素。然而，中药的结构复杂，活性成分种类繁多，加之其含量低、不稳定，给中药活性成分的分离纯化带来了一定的困难。目前，分离纯化主要依靠硅胶柱、微孔吸附树脂柱色谱、聚酰胺柱色谱和高效逆流色谱的固相萃取，但提取率较低。分子印迹技术是建立在仿生科学、酶底物模拟和天然受体抗体的基础上的，其基本原理是通过模拟天然分子识别功能，将分子印迹识别位点引入聚合物材料中，制备出与目标分子在空间结构和结合位点上完全匹配的聚合物。分子印迹聚合物可以实现对目标分子的特异选择。随着研究的不断深入和应用领域的不断扩大，分子印迹技术在手性拆分、固相萃取、传感器、催化和有机合成等领域得到了广泛的应用，但也存在许多问题和不足。例如，传统的吸附剂选择性识别能力差，导致不可避免的基体干扰。此外，吸附固相不能满足二氢槲皮素的提取和检测要求。在最近的研究中，利用在Fe₃O₄纳米晶表面制备的磁性分子印迹吸附剂，结合紫外-可见分光光度法测定姜黄素的含量。Kolaei等人还利用Fe₃O₄磁性多层碳纳米管与Fe₃O₄纳米粒子，并在其表面涂覆乙烯端基。有学者以磁性多层碳纳米管为载体制备了一种新型分子印迹聚合物，并将其成功的应用于吗啡的提取与测定。采用酶提溶胶-凝胶法合成了具有核壳结构的磁性分子印迹聚合物纳米粒子，它们对槲皮素和儿茶素具有良好的识别和选择性。通过制备一种水相磁性分子印迹聚合物，结果表明，该分子印迹聚合物是在Fe₃O₄表面均匀合成的。吸附实验表明，吗啡及其类似物的萃取能力和选择性优于非印迹聚合物。这种分子印迹固相萃取柱磁分离系统通常用于检测食品、水果中的农药和兽药。这些磁性分子印迹聚合物能够克服洗脱时间长、模板渗漏、固相萃取等问题，但在快速提取、分离和测定藏药中生物化合物的结构和活性方面还不多见。