[发明专利]一种新型动物灌流的方法

权利要求书

1.一种新型动物灌流的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1.预热灌注系统

在手术前通过开始循环所有装有水套的组件的水浴来准备灌注系统，请确保管路清洁，并在必要时进行更换；要限制灌注液的速度，使用潮湿的腔室气泡收集器作为灌注液室；

2.血管导管插入术

2.1：使用麻醉机以0.3L/min的氧气流速在小鼠中诱导麻醉；

2.2；在双蒸馏水中用针预湿2根缝合线；用蒸馏水预热2根缝线；

2.3；将麻醉下的鼠仰卧在聚苯乙烯泡沫板上，头部朝向术者；用异丙醇擦拭腹部，并用剪刀沿腹部中线以“Y”形剪开腹部皮肤，并通过电凝、烧灼停止切口边缘出血

2.4；将胃，空肠和结肠推至鼠腹部右侧，露出腹主动脉和静脉；

2.5；在解剖显微镜下，使用4-0缝合线在雄性鼠中找到并结扎髂腰动静脉，在雌性鼠中发现并结扎卵巢动脉/静脉和髂腰动静脉；

2.6；在解剖显微镜下，在腹主动脉和下腔静脉下方下环行两根4-0丝线缝合，并在尾部缝合线上打一个松结；

2.7；在解剖显微镜下，将下腔静脉和腹主动脉一起伸展；使用24GA BD InsyteAutoguard翼形针穿刺腹主动脉，弹出针芯，然后将导管推入内部约5-8mm；对下腔静脉重复相同的步骤，并使用4-0缝线打两个结；

2.8；涂上即时胶以将导管固定在直立脊柱上，放回腹部器官并结束手术；

3.设置灌注系统

3.1；将鼠转移到硅垫上预热的带水套的潮湿室内，用19G针将导管翼固定到垫上；

3.2；用预热的灌注缓冲液填充动脉导管的末端和入口，然后使用鲁尔锁紧式连接器将导管末端与入口灌注管连接；

3.3；将蠕动流速调节至0.6mL/min，并保持灌注流出开放式5-10分钟，以通过静脉导管冲洗血液；

3.4；使用鲁尔锁紧式连接器将静脉导管的一端与出口管相连，以形成闭合回路；此时，通过胸部穿刺或任何其他方法执行并验证鼠是否死亡；

3.5；在温暖潮湿腔室中进行灌注；灌注介质是林格氏乳酸盐，其中补充了5％的BSA；定期检查灌注液的水平，并根据需要添加更多；

3.6；可以在任何时间点将选择的试剂添加到灌注容器或注射端口中；

3.7；用荧光试剂灌注后，再用灌注缓冲液冲洗10分钟以最小化背景；然后采集组织用于相关实验研究。

2.根据权利要求1所述的一种新型动物灌流的方法，其特征在于，所述麻醉机是异氟烷兽医麻醉机。

3.根据权利要求1所述的一种新型动物灌流的方法，其特征在于，所述麻醉还可以使用氯胺酮/甲苯噻嗪或任何其他类型的腹膜内麻醉；采用脚尖捏合评估麻醉深度。

4.根据权利要求1所述的一种新型动物灌流的方法，其特征在于，所述下腔静脉下方为two动脉和静脉上方约1cm，相距5mm。

5.根据权利要求1所述的一种新型动物灌流的方法，其特征在于，可以在灌注结束前3h将10μL的10mg/mL Hoechst33342添加到灌注液中以染色细胞核，在灌注结束前30分钟添加50μL的1mg/mL DyLight 649凝集素对血管内皮细胞进行染色；灌注。