[发明专利]PBMC体外3D甲基纤维素琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基，其特征在于，所述培养基含有以下组分：1640培养基、胎牛血清、甲基纤维素、琼脂糖；各组分含量如下：1640培养基溶液10mg/mL，胎牛血清10-20v/v％，甲基纤维素1-1.5wt％，琼脂糖0.3-0.5wt％。

2.一种权利要求1所述PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、配制4％甲基纤维素溶液：(1)取10mL三蒸水加到250mL的三角瓶中，放入90℃水浴锅加热10min至80-90℃；(2)称量1.2g甲基纤维素粉末，在晃动下慢慢地加入到上述三角瓶中，持续晃动，直至所有甲基纤维素粉末润湿且分散均匀；(3)加入4℃的三蒸水20mL在冰水浴中持续搅拌至少30min；(4)采用高温高压灭菌锅进行灭菌，灭菌结束后，室温下降温后加适量三蒸水定容到30mL；冷却后置于冰箱内4℃保存过夜待用；

步骤二、配制3％甲基纤维素溶液：取上述配制4％纤维素溶液30mL，依次加入8×1640培养液5mL、胎牛血清5mL，混匀后放置冰箱4℃保存待用；

步骤三、配制3％琼脂糖溶液：称取0.6g琼脂糖溶液，准备100mL试剂瓶加入20mL三蒸水，将称取完成的琼脂糖溶液缓慢撒入三蒸水溶液内，进行溶解；采用高温高压灭菌锅灭菌，灭菌结束后，取出放入50℃水浴箱60min，冷却至50℃，待用；

步骤四、配制1.5％琼脂糖溶液：取步骤三配制的3％琼脂糖溶液20mL，依次加入经过滤灭菌的4×1640培养液10mL、三蒸水5mL、含胎牛血清的1640培养液5mL；

步骤五、配制3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基：将按上述步骤二配制得到的3％甲基纤维素溶液和步骤四配制得到的1.5％琼脂糖溶液按体积比分别加入至新容器并充分混合，即得3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基。

3.根据权利要求2所述PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基的制备方法，其特征在于，步骤三中琼脂糖溶液溶解操作为微波炉低火2min。

4.权利要求1所述PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基实施培养的具体操作为：将PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基与已经配制好的淋巴细胞培养液按比例混合，充分混合后25-30℃下30-45分钟形成水凝胶，然后放入二氧化碳培养箱，37℃，5％CO₂条件下培养。