[发明专利]一种免提取全血PCR扩增反应体系及其扩增试剂盒和扩增方法

说明书

本申请涉及全血核酸扩增方法，尤其涉及一种免提取全血PCR扩增反应体系及其扩增试剂盒和扩增方法。一种免提取全血PCR扩增反应体系，该反应体系由以下组分构成：α‑环糊精2.0‑8.0%；海藻糖10‑25%；左旋肉碱3.0‑15%；PVP2.0‑8.0%；Tris‑HCl 20‑80mM；硫酸铵5.0‑20mM；硫酸镁1.0‑7.0mM；pH8.0‑9.5；余量为水，上述的百分比为质量百分比。该反应体系不需另外加入核酸释放剂，通过α‑环糊精、海藻糖、左旋肉碱的配合作用就能起到很好的扩增作用，扩增效率高，减少了全血中对PCR的抑制作用，从而实现了快速的PCR扩增检测。

技术领域

本申请涉及全血核酸扩增方法，尤其涉及一种免提取全血PCR扩增反应体系及其扩增试剂盒和扩增方法。

背景技术

实时荧光定量PCR技术已广泛应用于遗传病分子诊断、临床检验、动植物进出口检疫、食品安全监测、土壤微生物检测和亲子鉴定等众多领域。由于血液、食物、土壤等样本中含有大量抑制因子，如血红蛋白、高铁血红素、乳铁蛋白、腐植酸等，对常规Taq DNA聚合酶将产生明显的抑制作用。因此，必须先从这些待测样本分离提取核酸，然后用于PCR扩增。核酸提取是核酸检测第一步，也是分子生物学中关键方法之一。为下游核酸检测提供基础，提取质量和完整性直接影响临床研究或诊断。

目前常用于提取外周血中DNA的方法有酚/氯仿提取法、盐析法、碘化钾法、煮沸裂解法等基于这些方法原理开发了很多商品化的DNA提取试剂盒。尽管如此，提取DNA的操作仍然繁琐而费时，DNA质量也参差不齐，而且容易造成样本间交叉污染。如果不经过DNA提取，而直接从全血进行PCR扩增，则可以大大节约试验时间和成本，同时避免因繁多步骤造成的样本间交叉污染。

中国发明专利申请(公开号：CN 103789299A，公开日：2014.05.14)公开一种应用于生物医学分子分析研究领域中的进行全血基因组快速扩增的方法，全血基因组快速扩增的方法是通过核酸释放剂及与之相匹配的PCR反应液来实现的，该方法通过先加入核酸释放剂再加入PCR反应液来配合实现，这样虽然可以减少后续PCR的干扰，但也增加了操作的步骤。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本申请的目的是提供一种免提取全血PCR扩增反应体系，该反应体系不需另外加入核酸释放剂，通过α-环糊精、海藻糖、左旋肉碱的配合作用就能起到很好的扩增作用，扩增效率高，减少了全血中对PCR的抑制作用，从而实现了快速的PCR扩增检测。

为了实现上述的目的，本申请采用了以下的技术方案：

一种免提取全血PCR扩增反应体系，该反应体系由以下组分构成：

上述的百分比为质量百分比。

作为优选，该反应体系由以下组分构成：

上述的百分比为质量百分比。

作为优选，该反应体系由以下组分构成：

上述的百分比为质量百分比。

另外，本申请还公开了一种免提取全血PCR扩增试剂盒，该试剂盒包括权利要求1-3任意一项权利要求所述的反应体系。

作为优选，该试剂盒还包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、dd H2O。

另外，本申请还公开了一种免提取全血PCR扩增方法，该方法包括以下的步骤：按照总体系25ul，分别加入不同血液量，血液加入量分别占总体系的5％-40％，PCR体系采用所述的反应体系；进行PCR扩增。

本申请由于采用了上述的技术方案，具有以下的特点：