[发明专利]一种(2S,3S)-2-羟基-4-苯基丁烷衍生物的制备方法

权利要求书

1.一种(2S,3S)-2-羟基-4-苯基丁烷衍生物的制备方法，其特征在于：将底物、羰基还原酶和过量的异丙醇在含有再生供氢辅因子的缓冲液中进行生物酶催化反应获得转化液，再经连续浓缩结晶获得目标产物结晶；

所述底物为式（I）所示化合物，所述目标产物为式（II）所示化合物，其中，式（I）和式（II）中的R为相同的氨基保护基团；

其中，所述羰基还原酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述异丙醇在反应体系的浓度为15-60% (m/V) ，所述底物的投料浓度为80-200g /L。

2.根据权利要求1所述的一种(2S,3S)-2-羟基-4-苯基丁烷衍生物的制备方法，其特征在于：所述异丙醇在反应体系的浓度为20-50% (m/V)。

3.根据权利要求2所述的一种(2S,3S)-2-羟基-4-苯基丁烷衍生物的制备方法，其特征在于：所述羰基还原酶与底物的质量比为0.03-0.1:1，所述羰基还原酶催化反应的温度为35-45℃，缓冲液的pH为7-9。

4.根据权利要求3所述的一种(2S,3S)-2-羟基-4-苯基丁烷衍生物的制备方法，其特征在于：所述再生供氢辅因子为NAD⁺/NADP⁺，摩尔浓度为0.1-1.0 mmol/L。

5.根据权利要求4所述的一种(2S,3S)-2-羟基-4-苯基丁烷衍生物的制备方法，其特征在于：所述缓冲液为磷酸钾缓冲液或磷酸钠缓冲液，摩尔浓度为50-200 mmol/L，pH为8.0。

6.根据权利要求5所述的一种(2S,3S)-2-羟基-4-苯基丁烷衍生物的制备方法，其特征在于：反应体系中还加入0.01-0.05mol/L的镁离子。

7.根据权利要求5或6所述的一种(2S,3S)-2-羟基-4-苯基丁烷衍生物的制备方法，其特征在于：所述氨基保护基团选自叔丁基羰基、苄氧羰基、芴甲氧羰基、烯丙氧羰基、三甲基硅乙氧羰基、邻苯二甲酰基、对甲苯磺酰基、三氟乙酰基、邻(对)硝基苯磺酰基、苯甲酰基、三苯甲基、2,4-二甲氧基苄基。

8.根据权利要求7所述的一种(2S,3S)-2-羟基-4-苯基丁烷衍生物的制备方法，其特征在于：所述生物催化反应24小时的转化率不低于95.0%，所述目标产物的de值不低于99.5%。

9.根据权利要求1或8所述的一种(2S,3S)-2-羟基-4-苯基丁烷衍生物的制备方法，其特征在于，所述连续浓缩结晶的步骤是：

（1）向所述转化液中加入水，将有机相析出的产物离心，得到粗品；

（2）将粗品用甲醇复溶，40-50℃恒温下过滤，取清液经降膜蒸发器连续浓缩结晶；连续浓缩结晶的初始料液温度为40-48℃，当有晶体析出时将料液温度降为34-38℃；

（3）降膜蒸发后离心过滤获得目标产物结晶，母液回收到降膜蒸发器内继续浓缩结晶。

10.根据权利要求9所述的一种(2S,3S)-2-羟基-4-苯基丁烷衍生物的制备方法，其特征在于：所述目标产物结晶的结晶度不小于95%，纯度不低于99.95%，含量不低于99%。