[发明专利]一种海洋真菌来源azaphilones二聚体类化合物及其在抗结核药物中的应用

说明书

本发明提供了一种海洋真菌来源azaphilones二聚体类化合物及其在抗结核药物中的应用，所述化合物的结构式如式1或式2所示。通过发酵培养格孢菌（Pleosporalessp.）HBU‑135菌株，并从发酵产物中分离得到上述化合物。经验证，本发明化合物对多重耐药结核分枝杆菌(MDR‑TB)具有较强的抑制活性，可用作抗结核药物，应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及海洋天然药物化学领域，具体地说涉及一种海洋真菌来源azaphilones二聚体类化合物及其在抗结核药物中的应用。

背景技术

结核分枝杆菌作为结核病的致病菌，己经潜在感染了世界约三分之一的人口。其中 5％-10％的感染者将最终发病，而且每年新增感染人数900万，死亡人数约200万。目前，结核病在中低发展国家己成为导致死亡的第八大原因，而且在15-59年龄段的人口中，结核病更是成为继艾滋病和缺血性心脏病之后的第三大致死疾病。近年来由于多重耐药结核分枝杆菌(MDR-TB)出现，结核病的治疗面临极大挑战，寻找新型抗MDR-TB结核类药物先导化合物是人类健康领域内亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种海洋真菌来源azaphilones二聚体类化合物及其在抗结核药物中的应用，以解决现有技术中海洋真菌来源azaphilones类化合物的种类及抗结核活性有限的问题。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种海洋真菌，所述海洋真菌为格孢菌 (Pleosporales sp.)HBU-135菌株，保藏日期为2018年10月18日，保藏编号为CGMCCNo.16379，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

1.样品来源

海洋真菌HBU-135菌株分离自海洋沉淀物，所述海洋沉淀物样品于2015年6月采自河北省沧州市黄骅港海域。海底沉淀物样品采集后，立刻放于–20℃冰箱中保存，并送往实验室进行后续真菌的分离工作。

2.真菌的分离

2.1培养基的选择

(1)PDA培养基

马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，海盐30g，琼脂20g，水1000mL。分离真菌时加25μg/mL硫酸链霉素，25μg/mL氨苄青霉素，抑制细菌生长。

(2)无盐PDA培养基

马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL。分离真菌时加25μg/mL 硫酸链霉素，25μg/mL氨苄青霉素，抑制细菌生长(无盐PDA与加盐PDA对比)。

(3)孟加拉红培养基

马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，海盐30g，孟加拉红(rose Bengal)33mg(抑制生长快的霉菌蔓延生长)，琼脂20g，水1000mL。

2.2真菌的分离、纯化

将上述海洋沉淀物样品置于无菌玻璃器中，加入1mL无菌水调至黏稠状。取出0.1mL上述液体用无菌水分别稀释10倍、100倍、1000倍，得到4个浓度梯度的匀浆液，用无菌移液管分别取0.2mL各浓度匀浆液分别加入PDA、无盐PDA、孟加拉红培养基中，用涂布器涂匀。每个浓度梯度分别做三个平行。用封口膜封好，并写上编号。以上分离实验均在无菌条件下进行。

将上述加入样品的培养基分别放入28℃恒温箱，倒置培养。一般培养5–8d便有菌落或者菌丝体从培养基或者组织小块边缘长出来(细菌生长快，2–3d就有菌落生长出来)。用接种针挑取菌落或者菌丝体尖端，移至新的平板上，经几次分离纯化后，可获得真菌纯菌株。真菌分离工作一般进行35d。前两周每天检查一次，以后每隔3–4d检查一次。一旦发现有新的菌落或菌丝体长出，应马上将其转接到新的平板上。