[发明专利]一种保藏菌种保护剂及保藏方法

说明书

本发明公开了一种保藏菌种保护剂及保藏方法。所述的保藏菌种保护剂包含以下质量百分比原料：8‑12％甘油、3‑8％海藻糖溶液、余量为去离子水。保藏菌种保护剂具体制备方法为：按照保藏菌种保护剂质量百分比原料配比，将甘油、海藻糖溶液、去离子水混合后经120～122℃，20min灭菌，得到保藏菌种保护剂。能消除悬浮在保护剂中的菌样的不均匀状态；能确保制品的质量；给传代生长创造了良好的环境。保证了蛋白质的稳定性。冷冻保存过程中无需实施程序降温，查找与活化操作方便。

技术领域

本方法属于生物发酵技术领域，特别是涉及一种保藏菌种保护剂及保藏方法。

背景技术

工业生产中常用的几种菌种保藏方法包括：定期转接法、液体石蜡保藏法、沙土管保藏法、冷冻真空干燥法、液氮超低温冻存法、-80℃低温冷冻保藏等。这些菌种保藏方法各有其优点和缺点。例如定期转接法，斜面在保藏期间培养基的水分易于蒸发而收缩、干涸、塌陷、变色，使其浓度增高，渗透压加大，因而会引起菌种退化甚至死亡；连续传代后一些有利性状会减弱；易造成杂菌污染。液体石蜡油保藏法：石蜡多为化学纯，若含有杂质，尤其是有毒物质，应用于菌种保藏则会影响菌种的生产性能；在保藏过程中石蜡会因为蒸发减少，会引起菌种退化甚至死亡；保藏的斜面须直立放置，占据的储存空间太大，对储存设备需求量大。沙土管保藏法：保藏载体之一的土，要取于贫瘠土，取材存在要求高，沙、土需要洗涤、除杂、除铁屑，沙土管中沙土的比例不固定，受沙土质量和菌种特性所影响，往往需要通过试验而定，存活率低、变异率高。冷冻真空干燥法：对设备的要求高，制备耗时长，对操作人员的技能要求高。液态氮超低温冻结法：需要先慢速冷冻至-40℃，然后再放入液氮罐内速冷至-190℃进行保存，操作相对繁琐，对设备要求也高。

发明内容

本方法的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种操作方便、简单易行、可操作性高、生物安全性高、保存效能高、保藏成本低的保藏菌种保护剂及保藏方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种保藏菌种保护剂包含以下质量百分比原料：8-12％甘油、3-8％海藻糖溶液、余量为去离子水。

作为优选，所述的保藏菌种保护剂包含以下质量百分比原料：10％甘油、5％海藻糖溶液、余量为去离子水；

一种保藏菌种保护剂制备方法为：按照保藏菌种保护剂质量百分比原料配比，将甘油、海藻糖溶液、去离子水混合后经120～122℃，20min灭菌，得到保藏菌种保护剂。

一种保藏菌种保护剂的保藏方法：将菌种与保藏菌种保护剂混合后，用冻存管分装好后放入100孔冻存管盒内，盒盖上做好标记，置于-80℃冰箱内直接一步冻存，活化操作时，从冰箱中取出制品，立即放置在30℃-35℃水浴中快速摇动复苏，使得内部结冰全部溶解为止。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：在现有超低温保藏技术的方法上，大大降低了保藏成本，无需购买专用设备，所用保藏菌种保护剂价廉易采购，冻存管制备程序简单、耗时短。存活率高、纯度高、传代三代内稳定性好。

与单一采用高浓度甘油做保护剂相比，有以下优点：能消除悬浮在保护剂中的菌样的不均匀状态；能确保制品的质量；给传代生长创造了良好的环境。保证了蛋白质的稳定性。冷冻保存过程中无需实施程序降温，查找与活化操作方便。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：采用中国农科院食用菌研究开发中心提供的3种平菇菌株为参试菌株，为平菇一号菌株，平菇二号菌株，平菇三号菌株，考察本保藏菌种保护剂对三种平菇菌株冷冻保存后成活率的影响。

保护剂配制：10％甘油、5％海藻糖溶液、余量为去离子水。