[发明专利]一种不脱钙骨组织塑料包埋超薄制片方法

权利要求书

1.一种不脱钙骨组织塑料包埋超薄制片方法，包括依次进行的固定、脱水、浸透、包埋、切片和染色步骤，其特征在于：所述固定、脱水、浸透和包埋步骤均在4℃条件下进行。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述固定步骤是采用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液固定组织标本，固定时间为24h～72h、温度为4℃、压强为0.1MPa。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述组织标本大小为：直径0.5cm，长1.5cm～2.5cm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述脱水步骤是对组织标本进行梯度脱水，具体是分别用60％v/v乙醇脱水120min、70％v/v乙醇脱水120min、80％v/v乙醇脱水120min、95％v/v乙醇脱水120min、100％v/v乙醇脱水120min、100％v/v乙醇脱水120min，脱水温度为4℃、压强为0.1MPa，然后用4℃预冷的纯丙酮吸附组织标本中残留乙醇。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述浸透步骤是用甲基丙烯酸羟乙脂作浸透液浸透脱水后组织标本，浸透的温度为4℃、压强0.1MPa、时间48～60h；在浸透进行到一半时，更换一次浸透液甲基丙烯酸羟乙脂，继续浸透。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述包埋步骤是从浸透液取出组织标本，放入包埋盒内，然后在包埋盒内加入包埋液后密封，将包埋盒在4℃冷藏24～36h、压强0.1MPa，取出后置于25℃放置72h、压强0.1MPa，然后去掉包埋盒，得到包埋块。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述包埋液是由甲液和乙液按体积比100∶2～100∶4混合而成；其中甲液由甲基丙烯酸羟乙脂、聚乙二醇400和过氧化苯甲酰按体积比950：80：7混合而成，乙液由聚乙二醇400和N，N-二甲基苯胺按体积比20：1混合而成。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述切片步骤是用钢锉磨去包埋块底部，暴露出组织切面，然后用切片机将组织切面切成3～5μm薄片，并在60～80℃电热板上充分烤1.5-2.5h。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述染色步骤是用苏木素-姬娒萨-伊红将薄片染色，然后用中性树胶封片。