[发明专利]用于检测胃癌的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述用于检测胃癌的试剂盒包括以下组分：PCR检测核苷酸预混液，所述PCR检测核苷酸预混液中含有以下核苷酸序列：核苷酸序列01、核苷酸序列02、核苷酸序列03、核苷酸序列04、核苷酸序列05、核苷酸序列06、核苷酸序列07、核苷酸序列08、核苷酸序列09、核苷酸序列10、核苷酸序列11、核苷酸序列12、核苷酸序列13和核苷酸序列14，核苷酸序列01~核苷酸序列14的具体序列为：

其中，所述核苷酸序列04的3’端带有间壁3修饰或磷酸化修饰，核苷酸序列11的3’端带有间壁3修饰或磷酸化修饰；所述核苷酸序列04的第5、14、22、32位腺嘌呤核苷酸带有锁核酸修饰；所述用于检测胃癌的试剂盒还包括以下组分：血浆游离DNA甲基化处理试剂、PCR检测预混液和质控品试剂。

2.如权利要求1所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述血浆游离DNA甲基化处理试剂包括亚硫酸氢盐修饰试剂、DNA保护液、脱磺液、结合液、漂洗液、pH=8.0的洗脱液、和/或氧化硅磁珠悬浮液。

3.如权利要求2所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述亚硫酸氢盐修饰试剂使用时按照40-60g/ ml去离子水进行溶解使用。

4.如权利要求2所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述DNA保护液包含溶解在二甲醚中的水溶性VE，水溶性VE在保护液中的浓度为2.5-4.5 mol/L。

5.如权利要求2所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述结合液包括异硫酸氢胍，异硫酸氢胍在结合液中的浓度为5-8M。

6.如权利要求2所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述脱磺液包括氢氧化钠，氢氧化钠在脱磺液中的浓度为1.3-1.8 M。

7.如权利要求2所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液可以包括75%无水乙醇或者浓度为9-11 mM的Tri-Hcl。

8.如权利要求2所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括Tri-Hcl，Tri-Hcl在洗脱液中的浓度为10 mmol/L。

9.如权利要求2所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述氧化硅磁珠悬浮液含有70-90mg/ml氧化硅磁珠。

10.如权利要求1所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述质控品包括阳性质控品、阴性质控品、和/或空白质控品。

11.如权利要求10所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述质控品中阳性质控品为转甲基后的细胞系gDNA和模拟血浆，阴性质控品为脱甲基后的人血细胞gDNA和模拟血浆，空白质控品为模拟血浆。

12.如权利要求1所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述PCR检测预混液，包括聚合酶缓冲液、DNA热激聚合酶、镁离子、dNTPs、和/或甜菜碱、和/或二甲基亚砜。

13.如权利要求12所述的用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述聚合酶缓冲液含有2×聚合酶缓冲液；DNA热激聚合酶的含量为0.26 U/μl；镁离子化合物为MgCl₂，镁离子浓度为25 mM；dNTPs浓度为3.8mM。

14.一种用于检测胃癌的试剂盒的应用，其特征在于，所述应用为使用权利要求1~13任一所述用于检测胃癌的试剂盒制备实时监测胃癌的药物。