[发明专利]一株产酸性菊粉酶的植物乳杆菌及其应用

权利要求书

1.一株产酸性菊粉酶的植物乳杆菌Lactobacillus plantarum3-2，其特征在于，其序列如下：

该菌株已于2019年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M201997。

2.权利要求1所述的植物乳杆菌Lactobacillus plantarum 3-2在生产酸性菊粉酶中的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1)种子培养

将植物乳杆菌Lactobacillus plantarum 3-2划线至MRS固体培养基中，于30℃条件下静置培养直至出现单菌落；所述的MRS固体培养基配方如下：

牛肉膏10g，酵母粉5g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸二铵2.0g，乙酸钠5.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，吐温-80 1mL，琼脂20g，蒸馏水1000mL，在pH 6.6～6.8、121℃高压灭菌15min；

20％葡萄糖储备液：用超纯水配制葡萄糖溶液200g/L，121℃高压灭菌20min；

使用时加入终浓度为2％的葡萄糖储备液；

(2)发酵培养

将MRS固体培养基中的单菌落划线至固体发酵培养基中，于30℃条件下静置培养直至出现单菌落；挑取固体发酵培养基上正常生长的单菌落，接种到液体发酵培养基中，在温度为30℃的条件下，静置发酵1～2天，得到发酵液；所述固体发酵培养基配方如下：

牛肉膏10g，酵母粉5g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸二铵2.0g，乙酸钠5.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，吐温-80 1mL，琼脂20g，蒸馏水1000mL，在pH 6.6～6.8、121℃条件下高压灭菌15min；

20％葡萄糖储备液：用超纯水配制葡萄糖溶液200g/L，在121℃条件下高压灭菌20min；

(3)制备酸性菊粉酶

吸取发酵液10mL，在4℃、10000r/min条件下，离心5min，弃去上清液，保留沉淀，向沉淀中加入0.2mol/L、pH 5.0的醋酸缓冲溶液400μL重悬沉淀后，加入100mg/ml的溶菌酶200μL，于30℃条件下静置2h，再加入0.12g石英砂，随后在-30℃条件下于高通量组织研磨器研磨240s，破胞结束后，在4℃、13000r/min条件下离心30min，取上清液，即为酸性菊粉酶。