[发明专利]一株产酸性菊粉酶的植物乳杆菌及其应用在审
申请号: | 202010237731.3 | 申请日: | 2020-03-30 |
公开(公告)号: | CN111235073A | 公开(公告)日: | 2020-06-05 |
发明(设计)人: | 王成华;陈睿;黄澄;李晓明;陆迪 | 申请(专利权)人: | 南宁中诺生物工程有限责任公司 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12N9/24;C12P19/14;C12P19/02;C12R1/25 |
代理公司: | 广西南宁公平知识产权代理有限公司 45104 | 代理人: | 王素娥 |
地址: | 530003 广西壮族*** | 国省代码: | 广西;45 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一株产 酸性 菊粉 植物 杆菌 及其 应用 | ||
1.一株产酸性菊粉酶的植物乳杆菌Lactobacillus plantarum3-2,其特征在于,其序列如下:
该菌株已于2019年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M201997。
2.权利要求1所述的植物乳杆菌Lactobacillus plantarum 3-2在生产酸性菊粉酶中的应用,其特征在于,包括如下步骤:
(1)种子培养
将植物乳杆菌Lactobacillus plantarum 3-2划线至MRS固体培养基中,于30℃条件下静置培养直至出现单菌落;所述的MRS固体培养基配方如下:
牛肉膏10g,酵母粉5g,蛋白胨10g,磷酸氢二钾2g,柠檬酸二铵2.0g,乙酸钠5.0g,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,吐温-80 1mL,琼脂20g,蒸馏水1000mL,在pH 6.6~6.8、121℃高压灭菌15min;
20%葡萄糖储备液:用超纯水配制葡萄糖溶液200g/L,121℃高压灭菌20min;
使用时加入终浓度为2%的葡萄糖储备液;
(2)发酵培养
将MRS固体培养基中的单菌落划线至固体发酵培养基中,于30℃条件下静置培养直至出现单菌落;挑取固体发酵培养基上正常生长的单菌落,接种到液体发酵培养基中,在温度为30℃的条件下,静置发酵1~2天,得到发酵液;所述固体发酵培养基配方如下:
牛肉膏10g,酵母粉5g,蛋白胨10g,磷酸氢二钾2g,柠檬酸二铵2.0g,乙酸钠5.0g,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,吐温-80 1mL,琼脂20g,蒸馏水1000mL,在pH 6.6~6.8、121℃条件下高压灭菌15min;
20%葡萄糖储备液:用超纯水配制葡萄糖溶液200g/L,在121℃条件下高压灭菌20min;
(3)制备酸性菊粉酶
吸取发酵液10mL,在4℃、10000r/min条件下,离心5min,弃去上清液,保留沉淀,向沉淀中加入0.2mol/L、pH 5.0的醋酸缓冲溶液400μL重悬沉淀后,加入100mg/ml的溶菌酶200μL,于30℃条件下静置2h,再加入0.12g石英砂,随后在-30℃条件下于高通量组织研磨器研磨240s,破胞结束后,在4℃、13000r/min条件下离心30min,取上清液,即为酸性菊粉酶。
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