[发明专利]一种分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法

说明书

本发明公开了一种分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，采用大赛璐键合型手性色谱柱，以正己烷、异丙醇、甲醇的混合溶液作为流动相，在一定条件下进行等度洗脱；本发明分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，该方法简便，能够同时分离检测富马酸丙酚替诺福韦的多个异构体及其他有关物质，并且色谱峰峰型良好，结果准确，可用于富马酸丙酚替诺福韦生产过程的质量控制。

技术领域

本发明涉及一种分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，属于医药分析检测领域。

背景技术

富马酸丙酚替诺福韦，其结构式如图1所示，富马酸丙酚替诺福韦，英文名字为Tenofovir Alafenamide，为吉利德(Gilead)公司推出的一个抗艾滋病毒和乙肝病毒的替诺福韦的前药(代号GS-7340)。富马酸丙酚替诺福韦是一个含有3个手性中心化合物，如图2所示，其理论上应该有7个光学异构体(其中3对非对映异构体，1个对映异构体)，均为杂质。在医药领域中，对化学药品的杂质的控制关乎到药品的质量和使用安全，因此对化学药品的有关物质进行准确地分析检测，控制其含量是非常有意义的。

中国专利申请号01813161.1核苷酸膦酸酯类似物前药及其筛选和制备方法中公开了一种采用反相HPLC分离检测富马酸丙酚替诺福韦及其一个非对映异构体的分析方法；该分析方法采用Phenomenex Luna C18 5μm，100A°(或等效色谱柱)；保护柱是PellicularC18(或等效色谱柱)；流动相是，A相含有0.02％磷酸(85％)的水-乙腈(95:5)溶液，B相是含有0.02％磷酸(85％)的水-乙腈(50:50)溶液；

梯度洗脱程序示意图如图3所示，

操作时间：50min；

平衡延迟：在100％流动相A的条件下为10min；

流速：1.2mL/min；温度：室温；检测：UV260nm；样品溶液：20mmol/L磷酸钠缓冲溶液，pH6。

上述方法能够有效地分离检测富马酸丙酚替诺福韦及其中之一的非对映异构体，但是其未能同时有效地分离检测其他的非对映异构体，以及存在的其他有关物质。因此，为了能够同时检测富马酸丙酚替诺福韦及其异构体以及其它有关物质，亟待提出一种新的分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提出了一种分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，分离方法简便，能够同时分离检测富马酸丙酚替诺福韦的多个异构体及其他有关物质，结果准确，可用于富马酸丙酚替诺福韦生产过程的质量控制。

本发明的分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，包括：

1）色谱柱：大赛璐键合型手性色谱柱；

2）流动相：正己烷、异丙醇、甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯和乙腈中的一种或几种的混合溶液；为实现较好的手性分离效果，可在流动相中添加合适的添加剂如二乙胺、乙二胺等；

3）检测波长：260nm；

4）柱温：27～45℃；

5）流速：0.7mL/min～1.5mL/min；

6）异构体混合储备溶液：分别取各异构体约5mg，置于10ml量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度作为异构体混合储备溶液；

7）系统适用性溶液：取富马酸丙酚替诺福韦样品约30～70mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入异构体混合储备溶液1ml，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为系统适用性溶液。

作为优选的实施方案，所述色谱柱为大赛璐CHIRALPAK IC柱，其粒径为5μm，内径为4.6mm，长度为250mm。