[发明专利]一种用于蔬菜尾菜青贮发酵的植物乳杆菌C20及其应用

说明书

本发明公开了一种用于蔬菜尾菜青贮发酵的植物乳杆菌C20及其应用，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)C20的保藏编号为CCTCC M 2019985 C20，其16S rRNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。该菌株作为发酵添加剂接种于尾菜青贮饲料，可以降低青贮饲料的pH、氨态氮、乙酸和丁酸含量，提高青贮饲料的粗蛋白、可溶性碳水化合物及乳酸含量，抑制霉菌、芽孢杆菌等腐败微生物生长，提高了尾菜青贮饲料的营养品质，改善了饲料的适口性，在尾菜青贮方面具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种植物乳杆菌菌株，具体为一 种用于蔬菜尾菜青贮发酵的植物乳杆菌C20及其应用。

背景技术

尾菜是指蔬菜采收后，经修整、分级、预冷、包装等商品化处理 后，为提高其商品性而剥离的蔬菜伤、病、残叶。尾菜的无序排放和 大量堆积，造成严重的资源浪费和环境污染。青贮是解决这一环境问 题、合理利用尾菜资源的有效手段，如何尾菜提高青贮品质也成为了 目前热门的研究课题。

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是乳酸菌的一种，也是青 贮过程中的优势菌群。大量研究表明，植物乳杆菌能否在青贮过程中 大量繁殖，是影响青贮饲料营养品质的关键。在青贮环境中植物乳杆 菌大量繁殖，产生乳酸，降低pH，抑制其它腐败微生物的活动，使 饲料的纤维含量下降3％～6％，粗蛋白含量提高0.5％～2％，从而延长 饲料保藏期，提高饲料适口性和消化率，改善饲料品质。植物乳杆菌 菌株本身的产酸能力、耐酸能力、耐高温能力和抑菌能力等发酵特性 的强弱是菌株能否大量繁殖成为优势菌群、发挥作用的决定性因素。 因此，从尾菜中分离筛选到具有良好发酵特性的植物乳杆菌制成青贮饲料添加剂对尾菜青贮饲料营养品质的提升具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一株分离自莴笋尾菜的植物乳杆菌，其具 有产酸、耐酸、耐高温和抗菌特性，旨在提高蔬菜尾菜青贮饲料的营 养品质，为蔬菜尾菜资源的合理利用找到更优方法，解决目前青贮乳 酸菌添加剂菌种功能单一、品性退化的现状。

本发明具体通过以下技术方案实现：

本发明提供的一种具有良好的发酵特性的植物乳杆菌 (Lactobacillusplantarum)C20，该菌株已进行保藏，保藏单位：中 国典型培养物保藏中心(CCTCC)；地址：湖北省武汉市武昌区八一路 299号武汉大学校内；保藏日期：2019年12月2日；保藏编号为CCTCC NO：M 2019985。

本发明植物乳杆菌C20的16S rRNA序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明从莴笋尾菜分离得到的植物乳杆菌C20，菌落形状呈圆形 突起，表面光滑，边缘整齐，乳白色，不透明，革兰氏染色阳性，接 触酶试验阴性，明胶液化试验阳性，兼性厌氧。

本发明的另一目的在于提供一种所述植物乳杆菌C20的分离方 法，所述分离方法为收集废弃的莴笋尾菜，厌氧发酵15天后进行植 物乳杆菌的分离。

本发明的另一目的在于提供一种所述植物乳杆菌C20的鉴定方 法，所述鉴定方法包括：对植物乳杆菌的产酸特性、耐酸特性、耐高 温特性和抑菌特性进行测定分析。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述植物乳杆菌C20制备 的发酵液，所述制备方法包括：将植物乳杆菌C20活化后接种于MRS 液体培养基中，37℃，120r/min的恒温摇床中培养，培养48h后， 作为种子液以体积比1:1加入MRS液体培养基，30℃，120r/min的 恒温摇床中培养48h使其活菌数达到1×10⁸cfu/mL，取出备用。

本发明的另一目的在于提供所述的植物乳杆菌C20或其发酵液 在蔬菜尾菜青贮发酵中的应用。

进一步的，所述的应用包括如下步骤：

(1)青贮原料及添加剂的准备