[发明专利]卡介菌甘露聚糖及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种卡介菌甘露聚糖及其制备方法和应用，所述卡介菌甘露聚糖具有如下通式I表示的结构，其以α(1→6)糖苷键为主链，而侧链甘露糖以α(1→2)糖苷键连接到此主链上，m和n表示重复单元数，且0＜n＜60，0≤m＜10。所述卡介菌甘露聚糖及含卡介菌甘露聚糖的药物组合物均具有强效的免疫调节活性，因此该卡介菌甘露聚糖及含卡介菌甘露聚糖的药物组合物具有在制备免疫调节用药物中应用的医用价值。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种卡介菌甘露聚糖及其制备方法和应用。

背景技术

分枝杆菌属细菌(Mycobacterium)是一类细长略弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名。该属细菌主要包括人结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、牛分枝杆菌(M.bovis)、非洲分枝杆菌(M.africanum)、坎纳分枝杆菌(M.canettii)、田鼠分枝杆菌(M.microti)、鸟分枝杆菌(M.avium)和麻风分枝杆菌(M.leprae) 等。分枝杆菌的细胞外部结构由三个部位组成，分别为细胞膜、细胞壁和荚膜。

卡介苗(Bacillus Calmette Guérin,BCG)是由减毒牛型分枝杆菌(M.bovis) 悬浮液制成的活菌苗，为目前预防结核病最有效的疫苗。自1948年以来，全球已有超过30亿人接种，其安全性有效性已被证实。卡介菌多糖核酸注射液(BCG polysaccharide nucleicacid，BCG-PSN)系用卡介菌培养后收集菌体，采用热酚法提取菌体中的多糖与核酸，经纯化后以灭菌生理氯化钠溶液配置而成。其中，多糖含量为0.28～0.42mg/mL，核酸含量为40～100μg/mL。BCG-PSN是我国首创的免疫调节剂，具有显著的免疫调节、抗炎和抗过敏作用，临床用于多种免疫失调或免疫水平下降及过敏性疾病，如难治性肺结核、支气管哮喘、支气管炎、病毒感染性疾病及皮肤变态反应疾病等。然而，BCG-PSN的组成成分复杂，质量较难以控制，不良反应风险较大，影响其药用价值和在同类药物中的市场竞争力。

发明内容

基于此，有必要提供一种结构新颖的具有免疫调节作用的卡介菌甘露聚糖及其制备方法和应用。

一种卡介菌甘露聚糖，所述卡介菌甘露聚糖具有如下通式I表示的结构：

其中，m和n表示重复单元数，且0＜n＜60，0≤m＜10。

经药理学研究发现，本发明的卡介菌甘露聚糖可以浓度依赖性促进巨噬细胞RAW264.7的增殖，且在12h和24h时效果显著；随着药物浓度的增加，卡介菌甘露聚糖吞噬中性红的能力明显增强，表明该卡介菌甘露聚糖能够增强巨噬细胞的吞噬功能；而且该卡介菌甘露聚糖能显著提高巨噬细胞的NO释放，进而在宿主免疫防疫、组织修复等生理活动中发挥一定作用。进一步的定性夹心免疫检测(ELISA)实验表明，该卡介菌甘露聚糖能够显著刺激巨噬细胞生成 TNF-α，而TNF-α是一种主要由巨噬细胞和淋巴细胞分泌的细胞因子，在宿主防御机制中发挥重要作用，对肿瘤具有直接溶解和抑制增殖的作用。因此，该结构新颖的卡介菌甘露聚糖具有增加免疫活性，因而具有免疫调节的实际应用价值。

在其中一个实施例中，所述卡介菌甘露聚糖的重均分子量为2000Da～40000 Da，多分散系数为1～3。

在其中一个实施例中，所述卡介菌甘露聚糖具有如下通式II表示的结构：

其中，n表示重复单元数，且0n60。

一种上述卡介菌甘露聚糖的制备方法，包括以下步骤：

获取分枝杆菌属细菌菌体；

提取所述分枝杆菌属细菌菌体的荚膜多糖；

提取所述荚膜多糖中重均分子量为2000Da～40000Da的组分，得到所述卡介菌甘露聚糖。