[发明专利]包含血液稳定性纳米颗粒的溶液、其制备方法及miRNA标志物的检测方法

说明书

本发明提供一种纳米颗粒溶液，其包含具有血液稳定性的聚合物胶束纳米颗粒，特别是修饰有功能分子例如核苷酸序列的纳米颗粒。本发明还提供制备所述纳米颗粒溶液的方法，以及利用所述纳米颗粒溶液检测微小RNA(miRNA)标志物的方法。

技术领域

本发明涉及纳米材料和医用纳米探针领域，具体涉及一种纳米颗粒溶液，其包含具有血液稳定性的聚合物胶束纳米颗粒，特别是修饰有功能分子例如核苷酸序列的纳米颗粒。本发明还涉及制备所述纳米颗粒溶液的方法，以及利用所述纳米颗粒溶液检测微小RNA(miRNA)标志物的方法。

背景技术

由于其独特的物理化学性能，纳米材料在医学领域中，尤其是在药物递送、医学检测、生物传感、医用材料改性等方面具有良好的应用前景。

在纳米材料的生物医学诊断应用中，会采用纳米颗粒来检测疾病标志物，通过比较检测前后纳米颗粒的荧光、颜色、聚集状态等变化对疾病进行诊断。其中，以生物可降解聚合物和天然磷脂等为原料的纳米颗粒因具有良好的生物相容性和循环稳定性，已被广泛用于药物运输和生物传感应用中。

对癌症患者进行早期筛查、早期确诊并进行治疗，能够显著提高患者治疗生存率，对癌症临床治疗具有重要意义。癌细胞的特征性分泌物及特异性抗原的单克隆抗体因具有检测方法便捷、检测灵敏度高等优点，已被用于临床的早期癌症筛查。然而，肿瘤分泌物检测受个体差异性影响较大，而癌细胞单克隆抗体检测存在检测成本高、干扰因素多、检测稳定性差等缺点，也限制了其临床应用。

miRNA是长度为20-24个核苷酸的非编码单链RNA分子，通过调控基因的翻译过程来调控基因表达。其中，能够调控癌细胞无限增殖、免疫逃逸、细胞迁移和血管生成等过程的miRNA正逐渐成为癌症检测和治疗的特定。另外，miRNA具有高度的特异性、序列保守等特点，是实现癌症超早期、超灵敏体外诊断的潜在选择。

现有的癌症早期诊断技术存在检测特异性差、检测结果不稳定、检测成本高等缺点，难以在癌症早期筛查中普及。另一方面，传统的miRNA检测手段主要为Northern杂交、微阵点分析和荧光定量PCR，这些检测手段耗时耗力、过程复杂、处理技术要求高、成本高，无法满足临床癌症早期筛查的要求。

借助高稳定性和安全性的纳米材料实现快速高效的miRNA检测，具有重要的应用和研究意义。

发明内容

本发明目的在于提供一种制备方法简单、血液稳定性高、生物安全性良好的聚合物胶束纳米颗粒溶液，通过在颗粒表面交联特定的核苷酸序列捕获特异性miRNA，该纳米颗粒捕获miRNA后会导致阿霉素分子的荧光淬灭，从而检出血液样本中的miRNA。本发明的纳米颗粒溶液和检测方法可促进miRNA检测技术更加便捷和高效，适用于对多种疾病尤其是癌症标志物的超早期、超灵敏体外检测。

本发明包括以下方面：

根据本发明的第一方面，提供了一种纳米颗粒溶液，所述纳米颗粒溶液包含具有血液稳定性的聚合物胶束纳米颗粒，所述纳米颗粒含有质量比为20:1～5:1的聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇嵌段共聚物(PLGA-PEG-COOH)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇嵌段共聚物(DSPE-PEG-COOH)；在另一实施方案中，所述纳米颗粒由质量比为20:1～5:1的聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇嵌段共聚物(PLGA-PEG-COOH)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇嵌段共聚物(DSPE-PEG-COOH)组成。

优选地，本发明的纳米颗粒溶液所含的纳米颗粒表面结合有功能分子，例如可与特定miRNA标志物互补配对的核苷酸序列、可靶向肿瘤细胞的靶向性分子、可与特异性抗原结合的抗体等。

优选地，本发明的纳米颗粒溶液所含的纳米颗粒的粒径大小为30～200nm，表面电荷为-20～-50mV。