[发明专利]检测新型冠状病毒的试剂和方法

说明书

本发明公开了一种新型冠状病毒(SARS‑Cov‑2)核酸检测方法的假病毒质控品及其应用，属于临床医学核酸分子检测技术领域。本发明将SARS‑Cov‑2特征性基因(ORF1ab、N和E)片段制成多种假病毒，形成阳性假病毒质控品体系。将其他高致病型的人类冠状病毒(SARS、MERS、HKU1、OC43、NL63、229E)各自特征性基因片段制备成一系列假病毒，形成阴性假病毒质控品体系。在临床医学对SARS‑Cov‑2进行核酸分子检测时，阳性假病毒质控品、阴性假病毒质控品与待测患者样本一同参与包括样本处理在内的整个实验操作流程，以有效地防止“假阴性”或“假阳性”的实验结果产生。本发明制备假病毒质控品体系的应用最大限度地降低了SARS‑Cov‑2核酸分子检测方法研究开发与验证过程中因高致病病原微生物所带来的生物安全性风险。

技术领域

本发明属于临床医学核酸分子检测技术领域，具体涉及检测新型冠状病毒 的试剂和方法。

背景技术

2019新型冠状病毒(SARS-Cov-2)是一种具有包膜的、不分节段的正链 单股RNA病毒，颗粒呈圆形或椭圆形，直径约60-140nm，属于网巢病毒目冠 状病毒科。此病毒每组基因组长度约三万个核苷酸左右，编码4个结构蛋白： S蛋白(spike protein)，M蛋白(membraneglycoprotein)，核衣壳蛋白N (nucleocapsid phosphoprotein)，和小包膜E(envelopeprotein)蛋白。其基因 序列显示SARS-Cov-2属于乙型冠状病毒属谱系β(BetacoronavirusLineage β, Sarbecovirus)进化树中分支较长的一种病毒，例如MERS-CoV或SARS-CoV。

在《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》(第七版)中明确规定：“五、诊断标 准，(二)确诊病例，疑似病例同时具备以下病原学或血清学证据之一者：1.实 时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性；2.病毒基因测序，与已知的新型 冠状病毒高度同源；3.血清新型冠状病毒特异性IgM抗体和IgG抗体阳性； 血清新型冠状病毒特异性IgG抗体由阴性转为阳性或恢复期较急性期4倍及以 上。”根据CDC和WHO的推荐，针对新型冠状病毒SARS-Cov-2的核酸诊断 一般是针对ORF1ab基因、N基因和E基因。目前，在临床医学检测中，新型 冠状病毒核酸检测已全面开展，已有多款新型冠状病毒核酸检测试剂盒获得了 批准。然而，在新型冠状病毒肺炎疫情防控的关键时期，在各医疗机构开展的 核酸分子检测过程中，报道了核酸检测结果“假阴性”现象，严重地影响了疫 情的有效防控。与此同时，防止新型冠状病毒核酸检测结果“假阳性”对于疫 情防控，节约珍贵社会医疗资源也显得相当重要。

在核酸检测试剂盒中设置阳性、阴性质控品，或者在核酸检测过程中添加 阳性、阴性质控品，以监测包括样本处理过程在内的PCR实验过程全流程， 是确保核酸检测结果有效性，防止“假阴性”或“假阳性”检测结果出现的最 有效手段。

目前，一般是选择体外转录的RNA或者临床阳性病毒作为质控品，用于 检测方法性能评价。但是两者都具有很明显的缺点：1.体外转录的RNA作为 质控品时自身质量不稳定，易受环境中RNase破坏；对样本处理过程不能有效 监控；2.临床阳性病毒作为质控品，对于高致病性病毒(例：新型冠状病毒、 SARS、MERS等)存在很高的生物安全风险。

本领域亟需新型冠状病毒的低风险高精度检测试剂和技术。

发明内容

本发明基于新型冠状病毒肺炎疫情防控需求，针对目前核酸检测常用质控 品存在的缺陷，利用装甲RNA病毒技术制备的新型冠状病毒(SARS-Cov-2) 阳性假病毒质控品和阴性假病毒质控品，应用到新型冠状病毒(SARS-Cov-2) 临床核酸检测过程中，有效地监控整个核酸检测过程，确保检测结果的准确可 靠，为中国乃至全球新型冠状病毒肺炎疫情防控发挥重要作用。

本发明提供一种核酸分子，包含选自(1)-(3)中一种、两种或三种的 序列：