[发明专利]一种邻苯二酚1,2-双加氧酶基因及其在合成4位取代顺，顺-粘康酸中的应用

权利要求书

1.一种重组菌在合成4位取代顺，顺-粘康酸中的应用，其特征在于，所述重组菌含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的编码基因；所述的4位取代顺，顺-粘康酸为4-乙基粘康酸和/或4-丙基粘康酸。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述重组菌的宿主菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述重组菌的重组载体的出发载体为pET28a。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将重组菌种子液接种到培养基中，培养至OD600_nm为0.6-0.8时，加入IPTG，诱导表达后，离心收集菌泥；

(2)全细胞催化：向Tris-HCl缓冲液中添加4位取代儿茶酚和步骤(1)得到的菌泥，建立全细胞催化反应体系，进行全细胞催化反应，生成4位取代顺，顺-粘康酸；

或酶催化：将步骤(1)得到的菌泥进行超声破碎，离心，得到含邻苯二酚1,2-双加氧酶的粗酶液；向Tris-HCl缓冲液中添加粗酶液和4位取代儿茶酚，建立酶催化反应体系，进行酶催化反应，生成相应4位取代顺，顺-粘康酸。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述的Tris-HCl缓冲液中Tris-HCl的终浓度为50-100mM；4位取代儿茶酚的终浓度为10-90mM；

其中，所述的全细胞催化反应体系中，菌泥的终浓度为5-20g/L；所述的酶催化反应体系中，粗酶液的终用量为0.1-1U/mL。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述的全细胞催化反应和酶催化反应均为在pH6.0-10.0，20-45℃反应1-9h。