[发明专利]一种血浆长链非编码RNA在冠心病筛查中的应用

权利要求书

1.一种血浆长链非编码RNA在冠心病筛查中的应用，其特征在于，所述血浆长链非编码RNA为ENST00000416361。

2.根据权利要求1所述一种血浆长链非编码RNA在冠心病筛查中的应用，其特征在于，所述血浆长链非编码RNA在冠心病筛查中的应用的建立方法步骤为：

选取冠心病组和正常对照组外周血血浆样本进行LncRNA-Seq高通量基因检测，样本RNA提取及质检；经过Illumina HiSeq测序仪测序，获得原始数据；使用cuffdiff软件计算并检测两组样品间的差异表达LncRNA ENST00000416361。

3.根据权利要求2所述一种血浆长链非编码RNA在冠心病筛查中的应用，其特征在于，所述血浆长链非编码RNA在冠心病筛查中的应用的建立方法步骤还包括如下步骤：

Q-PCR法验证LncRNA ENST00000416361差异表达

依据cuffdiff软件获得的数据，根据P-Value值≤0.05越小，Fold Change值越大的标准选取差异表达的LncRNA，使用Primer3进行引物设计，由于外周血游离LncRNA主要来自于外周血单核细胞，实验选取正常组、冠心病患者组外周血血浆以及外周血单核细胞各36例进行验证；同时对在冠心病患者血浆及单核细胞中上调表达的LncRNA coroMarker做对比验证；使用SYBR Premix Ex Taq(TakaRa)实时荧光定量试剂盒进行荧光定量PCR检测，内参为：β-actin(ACTB)；总反应体系为20μL，SYBR Premix Ex TaqⅡ(2×)10μL，PCR正向引物0.8μL，PCR反向引物0.8μL，以反转录的cDNA为模板2μL，双蒸水6.4μL，每组设3个平行，于罗氏Light Cycler480II仪器进行扩增反应；扩增条件为95℃预变性30s；95℃反应5s和60℃反应30s，循环40次；95℃反应5s和60℃反应1min，95℃分析溶解曲线。根据溶解曲线分析引物的特异性，以β-actin做内参，根据2^-△△CT方法计算基因相对定量的表达。

GraphPad Prism7数据分析，利用GraphPad Prism7对Real Time PCR数据结果进行表达量差异分析以及对数据进行ROC曲线分析。

4.一种非诊断用途的检测炎症发生及脂类代谢的方法，其特征在于：所述炎症发生及脂类代谢与血浆长链非编码RNA：ENST00000416361相关，通过检测ENST00000416361来确定炎症发生及脂类代谢。

5.一种非诊断用途的ENST0000041636与炎症因子表达相关性的检测方法，其特征在于，针对ENST0000041636设计si-ENST00000416361敲减序列为:

SEQ ID No.1：(5'-3')CCCAACAGCUCAUUGAGAATT，反向序列SEQ ID No.2：(5'-3')UUCUCAAUGAGCUGUUGGGTT；

siRNA-NC序列SEQ ID No.3:

(5'-3')UUCUCCGAACGUGUCACGUTT，

反向序列SEQ ID No.4：

(5'-3')ACGUGACACGUUCGGAGAATT；

Q-PCR并电泳鉴定敲减效率，检测细胞炎性因子IL-2、IL-4、IL-6、IL–10、IFN-γ、TNF-α，制定了标准产品和标准曲线，混合捕获微球溶液，200g离心5min，然后加入相同体积的微球缓冲液在暗处孵育30min，每管加入25μL混合微球，25μL样本和25μL荧光检测试剂，室温孵育2.5h，加入1ml的PBS，200g离心5分钟，加入100μL PBS，使用BD FACSCalibur检测细胞因子。

6.脂质相关基因SREBP表达的检测方法，其特征在于，所述脂质相关基因SREBP表达与ENST0000041636正相关，可以通过ENST0000041636检测脂质相关基因SREBP的表达量。