[发明专利]一种丙烯酰胺暴露检测的标志物及其应用

说明书

本发明公开了属于毒性物质检测技术领域的一种丙烯酰胺暴露检测的标志物及其应用。所述标志物为一种miRNA，所述miRNA为以下至少一种：miR27a、miR27a初始、miR27a前体、miR27a‑5p和miR27a‑3p。相比传统的风险评估方法，使用miRNA标志物检测具有先见性、灵敏性，从而使受害者在丙烯酰胺暴露早期就能尽早发现，从而采取相应的干预措施。

技术领域

本发明属于毒性物质检测技术领域，具体涉及一种丙烯酰胺暴露检测的标志物及其应用。

背景技术

丙烯酰胺(Acrylamide，AA)是一种具有亲水性的化学单体，常用于各种工业生产中，例如，污水处理、造纸和化工等方面，此外，它也被用于科学实验室的凝胶制备。2002年，瑞典科学家首次在食品中发现AA，它是在食品热加工过程中伴随着美拉德反应而产生的一种内源危害物。之后，世界各国均对食品中AA进行检测，结果表明，AA几乎存在于所有食品中，尤其在油炸马铃薯片等食品中含量达到几千甚至几万μg/kg，远高于世界卫生组织(WHO)规定的饮用水中AA限值0.5μg/L。对世界上17个国家AA摄入水平的评估结果显示，一般人群平均日摄入量为0.3～2.0μg/kg bw。这意味着人类存在AA的长期低剂量暴露。大量的动物实验和流行病学实验结果显示AA具有明确的神经毒性、生殖毒性、遗传毒性和潜在致癌性。因此，AA对人体健康的风险不容忽视。

目前，对于AA的毒性检测手段主要是通过检测血液中的血红蛋白加合物，此方法需要进行大量的前处理，并且对仪器要求较高。miRNAs是一类21-24nt大小的小分子RNA，可以与靶基因mRNA的3’UTR区域结合，在RNA沉默复合物的作用下，诱导靶基因mRNA的降解或者翻译的抑制，通过调控靶基因mRNA的表达参与生物体的多种生命活动。miRNA的形成过程：首先，在细胞核内转录成初级miRNA(pri-miRNA)，然后经过RNA酶剪切后，pri-miRNA成为长度约为70-80碱基并且含有发夹结构的pre-miRNA，出细胞核后，在细胞质内，经由Dicer/TRBP切割成长度为18-24个核苷酸的双链RNA，之后再解螺旋酶的作用下，双链RNA解开，其中一条链变为成熟miRNA。

另外，miRNAs的表达可以被不同的生物或非生物胁迫所改变，比如有害化合物(对氨基联苯)、氧化应激反应或者缺氧等。因此，miRNAs是各种应激反应中所必不可少的调节因子。此外，miRNAs的表达水平可以更先于表型的变化和显微镜的观察，即使有些表型变化没有显现出来，miRNAs的表达也会有变化发生。并且miRNA的异常表达可导致一些与疾病发生相关的基因表达异常，诱使疾病的发生。因此，筛选可用于丙烯酰胺暴露评估和监测的miRNA具有实用价值，检测miRNA的表达水平可以为丙烯酰胺的风险评估和毒性监测提供参考。

发明内容

为此，本发明的目的之一是提供一种miRNA作为丙烯酰胺暴露检测标志物的应用，所述miRNA为以下至少一种：miR27a、miR27a初始(pri-miR27a)、miR27a前体(pre-miR27a)、miR27a-5p和miR27a-3p。

其中，所述miR27a初始经过一次加工后，成为pre-miRNA即miR27a前体，miR27a前体经过Dicer酶酶切后，成为成熟miR27a，miR27a-5p和miR27a-3p分别为成熟miR27a靠近5’端和3’端的一部分，可以单独作为miRNA行使功能。

本发明的目的还在于提供一种丙烯酰胺暴露检测的试剂盒，包括检测上述miRNA表达量的试剂和/或芯片。

上述试剂盒中，所述芯片包括固相载体以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针。

进一步的，所述固相载体可采用基因芯片领域的各种常用材料，例如，但不限于尼龙膜，经活性基团(如醛基、氨基等)修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑料片等。