[发明专利]一种建立狐臭柴组织培养体系的方法

说明书

本发明公开了一种建立狐臭柴组织培养体系的方法。包括有以下步骤：取狐臭柴茎段为外植体，并对其进行表面消毒；将消毒后的外植体切段后，接种于愈伤诱导培养基中进行培养，得愈伤组织；将愈伤组织转入丛生芽诱导培养基中培养，生长得丛生芽；将丛生芽接于壮苗培养基中进行丛生芽的伸长和壮苗培养，至丛生芽长至2‑3cm，得丛生芽苗；将丛生芽苗，转接于生根培养基中进行培养，得狐臭柴生根苗。本发明通过对狐臭柴带腋芽茎段进行愈伤诱导，在短时间内培育出大量适宜移栽的狐臭柴种苗，能显著提高狐臭柴的种苗质量，有效解决狐臭柴扦插繁殖的季节局限性，可实现规模化生产，满足市场上对狐臭柴种苗需求的有益效果。

技术领域

本发明涉及一种组织培养体系的方法，特别是一种建立狐臭柴组织培养体系的方法。

背景技术

狐臭柴(Premnapuberula Pamp.)又名神仙豆腐柴，隶属于马鞭草科豆腐柴属的直立或攀援灌木至小乔木，具有清热解毒、消肿止血的作用，开发利用价值十分广阔。自然条件下狐臭柴种子萌发困难，其野生资源呈零星分布，故要实现狐臭柴资源的产业化开发，人工种植十分必要。

目前，狐臭柴主要以扦插繁殖为主，但扦插繁殖因抗性较差、多代繁殖后易引起退化，对扦插时间也有要求，具有一定的局限性，故寻求不同繁殖方式来弥补这一缺点。因此，通过狐臭柴快繁体系的建立，以期为狐臭柴种苗资源的产业化开发提供有效途径。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种建立狐臭柴组织培养体系的方法。本发明通过对狐臭柴带腋芽茎段进行愈伤诱导，在短时间内培育出大量适宜移栽的狐臭柴种苗，能显著提高狐臭柴的种苗质量，有效解决狐臭柴扦插繁殖的季节局限性，可实现规模化生产，满足市场上对狐臭柴种苗需求的特点。

本发明的技术方案：一种建立狐臭柴组织培养体系的方法，包括有以下步骤：

步骤一：取狐臭柴茎段为外植体，并对其进行表面消毒；

步骤二：将步骤一消毒后的外植体切段后，接种于愈伤诱导培养基中进行培养，得愈伤组织；所述愈伤诱导培养基为：B₅+0.5-2.0mg/L 6-BA+0.2-2.0mg/L2,4-D+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH 5.8-6.0；

步骤三：将步骤二中的愈伤组织转入丛生芽诱导培养基中培养，生长得丛生芽，所述丛生芽诱导培养基为：B₅+0.5-2.0mg/L 6-BA+0.2-1.0mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH5.8-6.0；

步骤四：将步骤三中的丛生芽接于壮苗培养基中进行丛生芽的伸长和壮苗培养，至丛生芽长至2-3cm，得丛生芽苗；所述壮苗培养基为：B₅+0.2-1.0mg/L 6-BA+0.2-1.0mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂， pH 5.8-6.0；

步骤五：将步骤四中的丛生芽苗，转接于生根培养基中进行培养，得狐臭柴生根苗；所述生根培养基为：3/4MS+0.5-2.0mg/L 6-BA+0.2-1.5mg/LIAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH 5.8-6.0。

前述的建立狐臭柴组织培养体系的方法中，所述步骤一中，狐臭柴茎段为狐臭柴当年生幼嫩茎段。

前述的建立狐臭柴组织培养体系的方法中，所述步骤一中，表面消毒的具体方法为：狐臭柴茎段去叶后，置于流水下冲洗1-2h，然后放置无菌操作台中，用75％酒精进行表面消毒45-75s后，无菌水冲洗2-3遍；之后再经0.1％升汞溶液消毒7-12min，最后用无菌水冲洗3-5遍。

前述的建立狐臭柴组织培养体系的方法中，所述步骤二中，是将步骤一消毒后的外植体切段，是指将消毒后的外植体切成至少带有一个腋芽且长为0.5-1.5cm的茎段。