[发明专利]双特异性单链抗体及其构建的嵌合抗原受体和应用

权利要求书

1.双特异性单链抗体，其特征在于，所述单链抗体结构为抗CD19ScFv轻链-Linker1-抗CD123ScFv轻链-Linker2-抗CD123ScFv重链-Linker1-抗CD19ScFv重链或抗CD123ScFv轻链-Linker1-抗CD19ScFv轻链-Linker2-抗CD19ScFv重链-Linker1-抗CD123ScFv重链，其中Linker1结构的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示，Linker2结构的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；所述抗CD19ScFv轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示，所述抗CD19ScFv重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；所述抗CD123ScFv轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示，所述抗CD123ScFv重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。

2.根据权利要求1所述的单链抗体，其特征在于，所述抗CD19ScFv轻链的核苷酸序列包含如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列，所述抗CD19ScFv重链的核苷酸序列包含如SEQ IDNO:3所示的核苷酸序列；所述抗CD123ScFv轻链的核苷酸序列包含如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列，所述抗CD123ScFv重链的核苷酸序列包含如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1-2任一项所述的单链抗体，其特征在于，所述单链抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示，或者核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示。

4.含有根据权利要求1-3任一项所述的单链抗体的CAR，其特征在于，还包含铰链区、跨膜区、胞内共刺激结构域和胞内活化信号。

5.根据权利要求4所述的CAR，其特征在于，所述CAR包含权利要求1所述的单链抗体，CD8铰链区，CD8跨膜区、CD137的胞内共刺激信号和CD3ζ胞内活化信号，所述CD8铰链区核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示；所述CD8跨膜区的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:24；所述CD137胞内共刺激信号核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示；所述CD3ζ胞内活化信号核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示。

6.根据权利要求4所述CAR，其特征在于，所述CAR的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，或者核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

7.权利要求4所示的CAR，其特征在于，所述CAR的氨基酸序列如SEQ ID NO:27或者如SEQ ID NO:28所示。

8.根据权利要求4所述的CAR修饰的免疫细胞。

9.根据权利要求8所述的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞为T细胞或B细胞或NK细胞。

10.包含权利要求4-7任一项所述的CAR结构的表达载体。

11.根据权利要求10所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为慢病毒表达载体、腺病毒表达载体、腺相关病毒表达载体中的任一种。

12.权利要求1所述的单链抗体或权利要求4所述的CAR或权利要求10所述的表达载体在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤为CD19和/或CD123阳性的肿瘤；所述肿瘤为恶性肿瘤，为急性淋巴样白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、前列腺癌、结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、肺癌、肾癌、肝癌、脑癌和皮肤癌。