[发明专利]中低温内切β-甘露聚糖酶及其编码基因和应用

权利要求书

1.一种中低温内切β-甘露聚糖酶作为水基压裂液破胶剂的应用，其特征在于，在水基压裂液中加入β-甘露聚糖酶粗酶液或重组菌发酵液；

所述β-甘露聚糖酶粗酶液或重组菌发酵液的获取方式为：将β-甘露聚糖酶基因导入宿主菌构建重组菌，将重组菌利用乳糖诱导表达，获取所述β-甘露聚糖酶粗酶液；或将重组菌发酵获取所述重组菌发酵液；

编码所述中低温内切β-甘露聚糖酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述重组菌的构建方法为：以pET28a为表达载体，在设计的上下游引物中分别加入NcoI和XhoI酶切位点作为构建重组表达载体的作用位点；将PCR胶回收后的基因和表达载体pET28a分别用NcoI和XhoI进行双酶切，酶切产物胶回收后，用T₄ DNA连接酶连接过夜；取连接产物转化至大肠杆菌E.coli BL21（DE3）感受态细胞，获取重组菌；

所述设计的上下游引物序列为：

对于SEQ ID NO：1所示基因序列：

BL27man1-F:5’- CATGCCATGGCCTTTAAGAAACATACGATCTCTT -3’；

BL27man1-R:5’- CCGCTCGAGTTCAACGATTGGCGTTAAAGAA -3；

对于SEQ ID NO：2所示基因序列：

BL27man2-F: 5’- CATGCCATGGCCACTGTGTCGCCTGTGAATCCTA -3’；

BL27man2-R:5’- CCGCTCGAGTTCAACGATTGGCGTTAAAGAA-3’。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，发酵培养基组分为：蛋白胨15g/L，酵母粉25g/L，NaCl 10g/L，甘油10g/L，葡萄糖2g/L，乳糖2g/L，其余为水。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述粗酶液或重组菌发酵液添加量为0.125%（v/v）。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述水基压裂液中底物浓度为8g/L。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述水基压裂液中底物为瓜尔胶、羟丙基瓜尔胶或阳离子瓜尔胶。

7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述水基压裂液成分为：每200mL含Gly-NaOH缓冲液100mM，底物1.6g，KCl 4g，Na₂S₂O₃ 2g，25%戊二醛100μL，硼砂0.6mg，pH7.0-9.0，其余为水。

8.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，对于SEQ ID NO：1所示基因表达的β-甘露聚糖酶，作用温度为35-50℃，pH7-8；对于SEQ ID NO：2所示基因表达的β-甘露聚糖酶，作用温度为20-50℃，pH7-9。