[发明专利]一种乳腺癌检测胶体金侧向层析试纸条和同时检测乳腺癌和宫颈癌的胶体金侧向层析试纸条

权利要求书

1.一种乳腺癌检测胶体金侧向层析试纸条，其特征在于，所述胶体金侧向层析试纸条包括PVC底板、硝酸纤维素膜、样品垫、结合垫和吸收垫；所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次粘附在所述PVC底板上并采用搭接的方式连接；

所述硝酸纤维素膜设有检测区T区和质控区C区；所述检测区T区包括T1线、T2线、T3线和T4线；所述质控区C区包括C1线和C2线；

以所述硝酸纤维素长边为行，所述T1线、T2线、T3线、T4线、C1线和C2线呈2行3列分布；所述T1线、T3线和C1线按照从结合垫到吸收垫的方向依次分布于第一行；所述T2线、T4线和C2线按照从结合垫到吸收垫的方向依次分布于第二行；

所述T1线上喷涂有T1线溶液；所述T1线溶液包括miR-16捕获探针；所述miR-16捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述miR-16捕获探针的3’端经生物素标记；

所述T2线上喷涂有T2线溶液；所述T2线溶液包括miR-191捕获探针；所述miR-191捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述miR-191捕获探针的3’端经生物素标记；

所述T3线喷涂有T3线溶液；所述T3线溶液包括鼠抗CA153蛋白单克隆抗体；

所述T4线喷涂有T4线溶液；所述T4线溶液包括鼠抗CA125蛋白单克隆抗体；

所述C1线喷涂有C1线溶液；所述C1线溶液包括miR-16控制探针和miR-191控制探针；所述miR-16控制探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述miR-191控制探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述miR-16控制探针和miR-191控制探针的3’端分别经生物素标记；

所述C2线喷涂有C2线溶液；所述C2线溶液包括二抗；

所述结合垫吸附有胶体金-检测探针偶联物；所述胶体金-检测探针偶联物包括胶体金-miR-16检测探针偶联物、胶体金-miR-191检测探针偶联物、胶体金-CA153蛋白-牛血清蛋白偶联物和胶体金-CA125蛋白-牛血清蛋白偶联物；所述miR-16检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；所述miR-191检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；所述miR-16检测探针和miR-191检测探针的3’端分别经巯基修饰。

2.根据权利要求1所述的胶体金侧向层析试纸条，其特征在于，所述T3线溶液中鼠抗CA153蛋白单克隆抗体的浓度为0.8～1.2mg/mL；所述T4线溶液中鼠抗CA125蛋白单克隆抗体的浓度为0.8～1.2mg/mL。

3.根据权利要求1所述的胶体金侧向层析试纸条，其特征在于，所述搭接的重叠部分的长度分别为2～3mm。

4.根据权利要求1所述的胶体金侧向层析试纸条，其特征在于，所述结合垫到吸收垫方向行依次分布的T1线、T3线和C1线和所述第二行依次分布的T2线、T4线和C2线，每个相邻位点间距为4～6mm。

5.根据权利要求1所述的胶体金侧向层析试纸条，其特征在于，胶体金-CA153蛋白-牛血清蛋白偶联物或胶体金-CA125蛋白-牛血清蛋白偶联物的制备方法，包括以下步骤：

将纳米金溶液、HPV蛋白溶液和牛血清蛋白溶液混合，进行偶联，得到胶体金-CA153蛋白-牛血清蛋白偶联物或胶体金-CA125蛋白-牛血清蛋白偶联物；所述HPV蛋白为CA153蛋白或CA125蛋白。

6.根据权利要求1所述的胶体金侧向层析试纸条，其特征在于，所述胶体金-miR-16互补序列探针偶联物或胶体金-miR-191互补序列探针偶联物的制备方法，包括以下步骤：

将纳米金溶液、dATP溶液、十二烷基硫酸钠溶液、NaCl水溶液和miRNA互补序列探针混合，进行偶联，得到胶体金-miR-16互补序列探针偶联物或胶体金-miR-191互补序列探针偶联物；所述miRNA互补序列探针为miR-16互补序列探针或miR-191互补序列探针偶联物。