[发明专利]一种降解酚酸类物质连作障碍因子菌株的快速筛选方法在审

专利信息
申请号: 202010256665.4 申请日: 2020-04-02
公开(公告)号: CN111455015A 公开(公告)日: 2020-07-28
发明(设计)人: 李红梅;李纪顺;魏艳丽;杨凯;扈进冬;刘宝军;吴远征;李玲 申请(专利权)人: 山东省科学院生态研究所
主分类号: C12Q1/04 分类号: C12Q1/04;C12N1/14
代理公司: 济南舜源专利事务所有限公司 37205 代理人: 于晓晓
地址: 250014 山*** 国省代码: 山东;37
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摘要:
搜索关键词: 一种 降解 酚酸类 物质 连作 障碍 因子 菌株 快速 筛选 方法
【说明书】:

发明涉及微生物应用技术领域,具体涉及一种降解酚酸类物质连作障碍因子菌株的快速筛选方法,所述方法为将菌株接种到含有酚酸类物质的培养基中培养,向培养液中加入显色试剂溴甲酚绿,根据溶液显示颜色的不同及深浅判断菌株对酚酸的降解能力。本方法以连作障碍因子酚酸类物质为底物,利用培养液pH不同显色不同的方法进行菌株的快速筛选,筛选150株菌株仅需7天时间,较液相色谱检测法效率提升4‑5倍,具有效率高、成本低的特点。

技术领域

本发明涉及微生物应用技术领域,具体涉及一种降解酚酸类物质连作障碍因子菌株的快速筛选方法。

背景技术

近年来,连作障碍问题是农业科学研究领域的热点。导致连作障碍的众多因素中,自毒物质积累是重要因素之一,自毒物质主要包括萜类和酚类,能够通过植物挥发、淋溶、根系分泌、凋落物及其残体分解等方式释放到土壤环境中,其中酚酸类物质是活性较强的一类自毒物质。研究表明,酚酸可以显著改变土壤的理化性质,微生物种类及活性,也可对植物体内酶的含量与活性,细胞膜的通透性,矿物元素的吸收,叶绿素含量等产生影响,进而对植物的生长产生抑制作用;同时,在连作条件下,酚酸可间接刺激土传病原微生物繁殖,提高植株发病率,如黄瓜根系分泌物中的香豆素可以显著影响根际土壤微生物群落并促进土传病原菌生长,香草酸可以显著影响黄瓜根际镰刀菌属和木霉属真菌群落结构和丰度。酚酸类物质在连作土壤中的积累特性已在水稻、大豆、花生、黄瓜、中药材及林木等多种植物中被证实。

利用微生物分解根际土壤中的酚酸类物质,从而降低土壤中的酚酸含量,缓解其对作物的自毒作用,被认为是解决连作障碍的有效途径。现阶段,酚酸类降解菌分离筛选方法均采用以酚酸类物质为唯一碳源的无机盐培养基,后期需经过液相色谱分析酚酸的残留量判断菌株是否具备降解酚酸的能力,该种筛选方法需要专业人员、专业设备(旋转蒸发仪、液相色谱仪等),时间长、效率低、不适宜大规模快速筛选。

因此,研究并提出一种快速高效的酚酸类降解菌株筛选方法,为连作障碍土壤修复提供一种新的方法,具有重要的现实意义。

发明内容

针对现有酚酸类降解菌株筛选方法专业要求高、时间长、效率低的技术问题,本发明提供一种降解酚酸类物质连作障碍因子菌株的快速筛选方法,本方法以连作障碍因子酚酸类物质为底物,利用培养液pH不同显色不同的方法进行菌株的快速筛选,具有效率高、成本低的特点。

一种降解酚酸类物质连作障碍因子菌株的快速筛选方法,所述方法为将菌株接种到含有酚酸类物质的培养基中培养,向培养液中加入显色试剂溴甲酚绿,根据溶液显示颜色的不同及深浅判断菌株对酚酸的降解能力。

进一步的,所述方法包括如下步骤:

(1)酚酸液体培养基的制备

取土豆水100mL、蒸馏水900mL和至少一种酚酸类物质混合均匀,配制成酚酸液体培养基,将液体培养基分装入试管中,高压灭菌,所述酚酸液体培养基中每种酚酸类物质的浓度均为100mg·L-1

(2)酚酸降解菌株的培养

将待测菌株在培养基上活化后,取5×106~5×107个孢子接入到酚酸液体培养基中,置于25℃、150rpm摇床中培养6d;

(3)显色

取1ml培养液,1000g离心1min,取上清200μL,加入显色试剂溴甲酚绿10μL,根据溶液显示颜色的不同及深浅判断菌株对酚酸的降解能力。

进一步的,所述酚酸类物质包括对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、对香豆酸、阿魏酸、苯甲酸。

进一步的,所述溴甲酚绿为0.1%溴甲酚绿溶液。

进一步的,所述菌株对酚酸的降解能力由大到小的标准为:蓝色蓝绿色深绿色浅绿色浅黄色。

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